青蒿琥酯抑制人结肠癌SW620细胞侵袭的研究.docVIP

　　青蒿琥酯抑制人结肠癌SW620细胞侵袭的研究 作者：范钰，张尤历，姚广涛，李仪奎 【摘要】 　　目的观察中药提取物青蒿琥酯（artemisunate，ART）对结肠癌细胞侵袭的作用，并探讨其可能机制。方法采用不同浓度的青蒿琥酯处理结肠癌S-1)蛋白变化。结果青蒿琥酯能有效地抑制结肠癌细胞S-1基因蛋白表达，呈时间和浓度依赖性（Plt;0.01）。结论青蒿琥酯可明显抑制结肠癌S-1蛋白水平有关。 【关键词】 青蒿琥酯； 结肠肿瘤； 锚着不依赖性增殖； 细胞间黏附分子 　　Abstract：ObjectiveTo study the effects and mechanism of Artemisunate on human colon cancer.MethodsAfter colon cancer S-1) isunate could significantly inhibit both invasion ability and anchorage independence groanner. The level of protEIn of ICAM-1 isunate can inhibit invasion of colon carcinoma cell line S-1)是体内重要的免疫活性分子，与肿瘤侵袭转移具有密切的关系［2，3］。为此，本研究采用ART处理结肠癌S-1蛋白表达的影响，以探讨其抗癌机制。 　 　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　青蒿琥酯，广西桂林第二制药厂产品，用0.5%NaHCO3溶解后再用生理盐水配置成所需浓度。RPMI1640、新生小牛血清，购自GIBCO公司。人结肠癌细胞株S-1单克隆抗体购自Santa Cruz公司。 　　1.2 细胞培养 　　人结肠癌SI1640液中培养，置37℃，50 ml/L CO2培养箱中。每日观察，待细胞至对数生长期，采用不同浓度的青蒿琥酯处理后，然后准备进行以下实验。 　　1.3 软琼脂集落培养实验 　　1.3.1 制备细胞悬液 　　将处理组及对照组细胞用含0.01%EDTA的0.25%胰酶消化，制备单细胞悬液，调整细胞浓度为2×103 细胞/ml，置室温备用。 　　1.3.2 制备底层琼脂 　　将1%的琼脂凝胶于微波炉完全溶化后放置45℃水浴中，温度平衡后与等体积45℃预温的汉20%新生小牛血清的RPMI 1640培养液混匀，加入6孔板中，每孔4 ml，置超净台中室温放置，令其充分凝固。剩余的琼脂粉/培养基混合物置于42℃水浴中待用。 　　1.3.3 制备上层琼脂取42℃保温的琼脂粉/培养基混合物1.2 ml与0.8 ml细胞悬液混合，迅速混匀，取1 ml铺于底层琼脂上，每个样品三复孔。同时做空白阴性对照及溶剂对照。置培养板于超净台室温待其充分凝固后，移入37℃，5%，CO2孵箱中培养14 d。 　　1.3.4 计数倒置显微镜下随机计数每组样品10个视野中的集落数，取其平均数作比较。结果采用方差分析。 　　1.4 体外侵袭抑制实验 　　该实验在改良的Boyden 小室中操作，根据 　 　2 结果 　　2.1 ART对结肠癌细胞软琼脂集落形成的影响 　　结肠癌S.编辑。 　　 　　2.3 ART对结肠癌细胞ICAM-1基因表达的影响 　　本研究采用-1蛋白水平的影响。结果发现，ART各个剂量组在作用细胞24 h后，ICAM-1蛋白表达就开始出现降低；随着作用时间的延长，ICAM-1蛋白降低更加明显，到72 h时非常显著。同时发现，ICAM-1蛋白水平降低与ART作用浓度密切相关。见图3。 　　3 讨论 正常真核细胞，除成熟血细胞外，大多须粘附于特定的细胞外基质上才能抑制凋亡而存活，称为锚着依赖性（anchorage dependence）。一般认为，肿瘤细胞在软琼脂形成集落的多少可反映肿瘤细胞锚着不依赖性增殖的特性，且与其恶性程度呈正相关。癌细胞侵袭能力强，则在软琼脂上形成的集落数目多。本研究发现，经不同浓度的青蒿琥酯处理的癌细胞软琼脂集落数明显受到抑制。说明，青蒿琥酯可在一定程度上抑制结肠癌细胞的侵袭能力。 　　肿瘤细胞本身的运动能力和侵袭力在肿瘤转移过程中发挥重要作用，运动能力不仅是肿瘤细胞侵袭周围组织，而且是侵入血管和穿出血管所必须。从理论上讲，抑制肿瘤细胞运动将抑制肿瘤细胞的浸润和转移。一旦肿瘤细胞从原发肿瘤上脱落，它们将侵入宿主的细胞外基质,然后，穿透淋巴管和血管。为此，肿瘤细胞的侵袭必须穿透血管周围的细胞外基质。本研究所用的基质胶(matrigel)含有Ⅳ型胶原、层粘蛋白、巢蛋白(entactin)、硫酸肝素蛋白多糖等成分，与细胞外基质的成分非常相近。因此，能有效地在体外模拟肿瘤细胞的侵袭过程。在体外侵袭实验中