结核分枝杆菌标准株H37Rv mazEF3基因过表达菌株的构建及初步鉴定.pdfVIP

第 34 卷第 1 期 石河子大学学报:自然科学版 Vo l. 34 No.l 2016 年 2 月 Journal of Shihezi University: Natural Science Feb. 2016 001: 10.13880/ki.65-1174/n.2016.01.009 文章编号: 1 ∞7-7383(2016)01-∞46-06 结核分枝忏菌标准株H37Rv mazEF3 基因 过表达菌株的构建及初步鉴定 屈艳琳，赵继利，刘微，申爱平，曹帅丽，袁俐* (石河子大学医学院病原生物学与免疫学教研室，新疆石河子 832∞2) 摘要:为构建 H37Rv mazEF3 基因的过表达菌株，检测过表达菌株 mazEF3 mRNA 表达水平。使用穿梭质粒 pMV361 ， 把 m但EF3 基因连入其中，构建重组质粒 pMV361-mazEF3 ;利用电穿孔技术，将穿梭表达质粒导人 H37Rv 中，并将该 菌涂在卡那霉素培养基上初步筛选，提取阳性菌株质粒进行 PCR 、双酶切后送公司测序进一步验证;检测不同电转 电压下 m也EF3 mRNA 表达水平，寻找最佳电转电压。结果显示，成功构建 H37Rv mazEF3 基因的过表达菌株，PCR 、 双酶切后目的基因，测序结果与已知 mazEF3 基因比对，同源性 l ∞%。实时荧光定量检测，电转电压为 23∞v 时，构 建的过表达菌株 mazEF3 mRNA 表达量最高。由此可知，成功构建及初步鉴定了 m田EF3 mRNA 过表达菌株，电转电 压为 23∞V 时，构建的过表达菌株 mazEF3 mRNA 表达量最高。 关键词:结核分枝杆菌;mazEF3 ;毒素-抗毒素系统;过表达 申图分类号:Q933 文献标志码:A The construction and preliminary identification.of mazEF3 gene overexpress Mycobacterium tuberculosis H37Rv strain QU Yanlin , ZHAO Jili , LIU Wei , SHEN Aiping , CAO Shuaili, YUAN Li (Department of Pathogenic Biology and Immunology , School of Medicine , Shihezi University , Shihezi, Xinjiang 832002, China) Abstract: To construct Mycobacterium tuberculosis standard strain (H37Rv) overexpressing mazEF3 gene and to detect the mazEF3 gene mRNA expression level. The shuttle-plasmid pMV361 was used , and the mazEF3 with the pMV361 was connected to construct a recombination plasmid pMV361-mazEF3. 币le shuttle-plasmid pMV361-mazEF3 was transfected into H37Rv by electroporation technology , and then the bacteria was inoculated and screened initially on kanamycin culture medium. The positive strains plasmid was extracted and fu rÙ!er verified after PCR and do