黄芪注射液对大鼠脊髓缺血再灌注损伤脊髓ICAM.docVIP

　　黄芪注射液对大鼠脊髓缺血再灌注损伤脊髓ICAM 作者：郝阳泉，尚荣安，王小兵，屈强，刘德玉，昝强 【摘要】 目的探讨黄芪注射液对脊髓缺血再灌注损伤的保护治疗作用及其机制。方法采用肾下腹主动脉阻断法,建立脊髓缺血再灌注模型。实验动物随机分3组，即空白组（a），模型组（b），黄芪预处理组（c）。空白组阻断腹主动脉30 min后开放灌注；黄芪注射液治疗组静脉注射黄芪12 ml/kg 30 min后阻断腹主动脉，阻断腹主动脉30 min后开放再灌注。术后进行神经功能评分,观察脊髓标本的病理改变, 免疫组化染色icam-1和hsp70的表达。结果神经功能评分治疗组在各时间点明显高于模型组(plt;0.05),组织病理学变化各时间点明显好于模型组, icam-1免疫阳性血管数较模型组减少，hsp70表达显著增加，且有显著差异(plt;0.05)。结论黄芪注射液可显著改善大鼠脊髓缺血再灌注引起的后肢神经功能障碍和组织病理学改变，表明黄芪注射液对大鼠脊髓缺血再灌注损伤有明显的保护作用；黄芪注射液降低大鼠脊髓缺血再灌注后缺血脊髓icam-1的表达，显著增加hsp70表达，可能为黄芪注射液保护脊髓缺血再灌注损伤的机制之一。 【关键词】 脊髓损伤；缺血再灌注；黄芪注射液；icam-1； hsp70 脊髓型颈椎病、脊柱骨折、脊髓供血动脉本身疾患、主动脉手术、脊髓内显微外科手术均可引起脊髓缺血再灌注损伤（sciri），有关脊髓缺血的保护研究，多数集中于技术性保护和药物性保护等防护措施，这些措施虽在一定程度上减轻了脊髓缺血损伤引起的神经功能障碍，但均没有稳定的疗效。.因此，寻找新的有效防护手段是一项亟待解决的课题。由于物理性预处理的方法技术操作复杂，对患者创伤较大，临床应用受到较大限制，近年来，更多的学者倾向于用药物来模拟这种物理性预处理的保护作用，诱导产生缺血耐受［1，2］。近年来中药防治sciri成为中医药研究的一个重要课题，中药作用的多用途性似乎与神经损伤病理变化的多样性具有针对性效应，具有广阔的应用前景。 　　1 器材 　　1.1 药品与试剂 　　黄芪注射液由成都地奥九泓制药厂提供，批号:国药准字icam-1试剂盒、hsp70试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司提供。 　　1.2 动物 　　健康雄性sd大鼠65只，体质量（250±20） g，平均250 g（陕西省中医研究院实验动物中心提供，许可证号：08-45）。 　　2 方法 　　2.1 分组与给药 随机分为3组， a 组：空白组（n=5），只暴露腹主动脉，然后关闭腹腔；b组：模型组（n=30），尾静脉注射等容量生理盐水30 min后阻断腹主动脉，阻断腹主动脉30 min后开放再灌注； c组：黄芪注射液预处理组（n=30） ,尾静脉注射黄芪注射液（12 ml/kg）30 min后阻断腹主动脉，阻断腹主动脉30 min后开放再灌注。神经功能评分：再灌注4，8，12， 24， 48 h及72 h，由一名不了解分组情况的观察者对动物后肢运动神经功能评分。 　　2.2 采用zivin［3］法复制模型实验动物大鼠以2%戊巴比妥钠按照40 mg/kg体质量进行腹腔麻醉后，仰卧位于手术台上，妥善固定，术中烤灯辐射加热，保持直肠温度38℃，腹部剪毛，取腹正中切口，无菌条件下开腹暴露并分离腹主动脉，手术分离腹主动脉至肾动脉水平，在肾动脉起始部远端用无创伤血管夹夹闭腹主动脉，阻断腹主动脉后，股动脉搏动立即消失并且大鼠下肢发绀。缺血30 min后移去血管夹，开始再灌注，检查主动脉及腹腔无明显损伤出血，关闭腹腔，伤口外涂红霉素软膏，即制成脊髓缺血再灌注损伤模型。术后常规青霉素40万单位肌肉注射，2次/d。分笼饲养，给予标准饲料喂养，供给清洁水，自由摄取。室温保持25℃左右，通风良好。 　　2.3 神经功能评分 评估标准：大鼠运动神经功能评分根据faden(1987)8点分级法和behrmann (1993) 5点分级法加以改进［4］。0分：后肢无自发运动，压夹后肢无反应；1分：后肢无自发运动，但夹后肢有嘶叫、逃避等反应；2分：后肢有自发运动，但不能负重站立；3分：能站立但不能行走；4分：能行走，但不能控制踝关节或足，只能靠膝关节或足内侧行走，且不稳定，腹部着地；5分：能行走，前后肢步态协调，后肢负重明显改善，腹部不着地，但数趾拖步；6分：能行走，仅一或二个足趾拖步，快速转弯时稍有不稳；7分：正常步态和行走。 　　2.4 icam-1 和hsp70免疫组化的测定脊髓icam-1免疫组织化学的测定: 将脊髓组织石蜡切片作icam-1 和hsp70免疫组化的测定。具体操作步骤按照说明书进行。图像分析: icam-1着色以胞浆为主，细胞核/浆染成棕黄色为阳性细胞。应用himas-2000多媒体彩色病