黑籽重楼种内形态标记和ISSR标记的遗传分化研究的论文.docVIP

　　黑籽重楼种内形态标记和ISSR标记的遗传分化研究的论文 作者：陈照， 叶睿超， 张瑞， 李伟阳， 王丽 【摘要】 　　该文对黑籽重楼paris thibetica种内两变种——黑籽重楼原变种paris thibetica var. thibetica与无瓣黑籽重楼paris thibetica var. apetala在形态学及issr分子标记上的差异进行了研究和比较。形态特征分析表明黑籽重楼原变种与无瓣黑籽重楼在萼片长宽、花药数、花丝长等7个花器官性状方面有显著差异，但通过在主成分分析图上不能明显区分两个变种，两变种总体形态上的分化不明显。issr分析上，从100个issr引物中筛选出8个引物，在300～1500 bp间共 扩增出 36条带，其中黑籽重楼原变种特征带有5条，无瓣黑籽重楼扩特征带有8条。 【关键词】 黑籽重楼 变种 形态差异 issr 　　abstract:the morphological differentiation analysis on paris thibetica var. thibetica and paris thibetica var. apetala orphological differentiation beters 100 issr primers. and 36 bands plified by issr-pcr, of orphological differentiation; issr 　　重楼是延龄草科(trilliaceae)重楼属(paris l.)植物的统称，是一类极具药用价值的植物。.《神农本草经》《本草纲目》《植物名实图考》及《中国药典》等都有所记载［1］，常用于治疗疔疮肿毒以及流行性腮腺炎等疾病。由于它还有抗癌止血，祛痰抑制细菌等功效［1］，现在是云南白药等许多中成药的主要成分［2］。 在李恒系统中，重楼属植物有24种，由于其形态变异较大，在种间、种内又有交叉重叠，这对于其形态分类及种质资源利用造成一定困难［3］。历年的《中国药典》只收载了滇重楼和华重楼2个种，实际上在民间除了少数稀有种外，几乎所有重楼属植物均能入药［3］。 　　黑籽重楼（paris thibetica）主要分布于西藏南部、云南西北部至西部, 四川西半部至峨眉山、甘肃南部、锡金、不丹也有。其下有黑籽重楼原变种(p. thibetica var. thibetica) 与无瓣黑籽重楼(p. thibetica var. apetala) 两个变种［1］。研究表明黑籽重楼有明显的镇静作用［4］，其富含的偏诺皂苷，是重楼的主要药效成分［1］。在滇重楼等利用过度的情况下［5］，对黑籽重楼进行种内分化和遗传多样性等研究，使其充分的了解种质资源，显得迫切并有必要。 　　传统的形态标记是遗传标记的基础［6］，是检测遗传多样性和区分种属间差别最直接的方法。但形态特征的变异除与自身遗传基础的变异相关外，还与其所处的环境等因素相关，是对基因的间接反映，并且形态标记的结果在缺乏严密的生物统计学分析下，结论往往不够完善。随着分子生物学的发展，dna分子标记由于具有直接分析遗传物质，与基因表达无关，信息量大和所需样品量小等优点，目前被普遍认为是评判遗传结构最好的方法。简单重复序列间标记(inter-simple sequence repeat，issr)是一种基于微卫星序列发展起来的分子标记［7］, 具有简便、多态性高, 稳定性和重复性好等优点，在分类学、种系发生学、保护生物学和种群遗传学等方面得到迅速应用［6］。 　　本实验通过形态差异分析结合数量统计方法对不同生境下黑籽重楼原变种和无瓣黑籽重楼的14项形态特征进行测定和分析，观察黑籽重楼的种内形态分化的水平，以达到了解其遗传多样性水平的目的。并采用issr分子标记技术对同域生长的黑籽重楼种下的黑籽重楼原变种和无瓣黑籽重楼进行分子水平的遗传分化的研究，寻找区别两变种的特征带。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料用于形态分析的黑籽重楼共来自于10个居群，其中黑籽重楼原变种（paris thibetica var. thibetica）分别来自于不同的7个居群，无瓣黑籽重楼(paris thibetica var. apetala)分别来自于不同的3个居群（见表1）。表1 形态分析材料（略） 　　用于issr分析的黑籽重楼原变种（paris thibetica var. thibetica）和无瓣黑籽重楼(paris thibetica var. apetala)均采集于四川彭州龙门山（海拔2 560 m），各变种各取3株，叶片均用硅胶干燥。凭证标本藏于四川大学生命科学学院植物标本室。 　　1.2 方法 　　1.2.1 形态指标测量及相关数据