第六章 细胞的冻复苏.pptVIP

三、非玻璃化冻存细胞的复苏 1.主要材料 (1)仪器设备：恒温水浴箱、普通离心机。 (2)培养用液：完全培养液（20%血清+基础 　　　　　　　 培养液） * 2.复苏过程 1)将恒温水浴箱的温度调至37～40℃。 2)从液氮中取出冻存小管，立即投入37～40℃温 水中快速晃动，直至冻存液完全融解。 要在1～2min内完成复温。 许多冷冻保护剂（如DMSO）在低温下能保护细胞，但在常温下却对细胞有害，故在细胞复温后应及时洗涤冷冻保护剂。 对绝大多数细胞而言，1%以下之冷冻保护剂DMSO，不会对细胞之贴附或活化有不良影响，不需立刻由解冻细胞中去除， 待第二天确定细胞生长或贴附良好后再去除即可。 * 但对极少数因对DMSO 敏感或会造成细胞分化之细胞，需立即去除DMSO。 3)将细胞冻存悬液移入离心管，加入约5m1培养 液，轻轻吹匀。 4)将细胞悬液经800～1000 r/min离心5min。弃上 清液。 5)给细胞沉淀物加入完全培养液，轻轻吹吸均匀。 将细胞悬液移入培养瓶内，加足培养液进行培 养。 * 四、细胞运送 一是用液氮或干冰保存运输，效果较好，但需用特制容器如小液氮罐等，又因液氮和干冰蒸发均较快，适于空运，比较麻烦。 二是充液法运输，比较简便。 　 * 充液法运输操作如下：