实验11 溴甲酚绿法测定血清清蛋白.pptVIP

* * 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） * 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验11 溴甲酚绿法测定血清清蛋白 北华大学医学检验学院　赵云冬 实验 11 溴甲酚绿法测定血清清蛋白 实验目的 掌握：溴甲酚绿法测定血清清蛋白实验原理。 熟悉：溴甲酚绿试剂配制。 了解：显色时间及试剂pH对测定结果的影响。 一、溴甲酚绿法测定血清清蛋白 二、显色时间改变对溴甲酚绿法 测定血清清蛋白结果影响 三、pH改变对溴甲酚绿法测定血清 清蛋白结果影响 实验原理 一、溴甲酚绿法测定血清清蛋白 溴甲酚绿（BCG）在pH4.20的环境中，有非离子去垢剂（Brij-35）存在时，可与清蛋白（Alb）结合形成蓝绿色复合物，在波长630nm处有吸收峰，其颜色的深浅在一定范围内与清蛋白含量成正比，与同样处理的清蛋白标准液比较，可求得血清中清蛋白含量。 试剂与器材 1．1mol/L NaOH溶液 2．0.5mol/L琥珀酸缓冲贮存液 3．10mmol/L BCG贮存液 4．叠氮钠贮存液 5．聚氧化乙烯月桂醚（Brij-35）贮存液 6．BCG试剂 此溶液pH应为4.15 ± 0.05。 7．60g/L清蛋白标准液 8．仪器 自动生化分析仪或分光光度计。 操作步骤 1．生化自动分析仪分析法 各参数见有关仪器操作说明书。 2．手工操作法 取试管3支，按表操作。 4.0 4.0 4.0 BCG试剂 － － 0.02 蒸馏水 － 0.02 － 清蛋白标准液 0.02 － － 血清 测定管 标准管 空白管 加入物(ml) 混匀，室温10min，在波长630nm处用空白管调零，读取标准管和测定管吸光度。 计算 参考范围 成人：清蛋白 （35~55）g/L，A/G =1.2~1.5 临床意义 1．血清清蛋白浓度增高 严重脱水所致的血浆浓缩。 2．血清清蛋白浓度降低 （1）蛋白质丢失 见于大出血和严重烧伤。 （2）摄入不足或消耗增加 营养不良、肠道肿瘤、肝功能受损、肾病蛋白尿、结核病伴慢性出血和恶性肿瘤等。 （3）合成障碍 肝脏疾病。 （4）清蛋白分布异常 门静脉高压患者清蛋白从血管内漏入腹腔；肝硬化导致门静脉高压时，由于合成减少和大量漏入腹腔，使清蛋白显著降低。 临床意义 3．无清蛋白血症 极少见的先天性清蛋白缺乏症，患者血清中几乎没有清蛋白。 4．A/G比值 某些病人可同时出现清蛋白减少和球蛋白升高的现象，严重者A/G比值＜1.0，这种情况称为A/G比值倒置。 注意事项 1．BCG是一种pH指示剂，变色域为pH3.8（黄色）~5.4（蓝色），必须严格控制反应液的pH，pH升高可使染料空白升高，与清蛋白结合率下降。 注意事项 2．BCG与蛋白结合的特异性较低，不但与清蛋白呈色，而且还可与其他蛋白质呈色，其中α1-球蛋白、TRF、Hp最明显，但反应速度不同，清蛋白可立即反应（快反应），其他蛋白质反应慢（慢反应）。由于血清与BCG试剂一经混合“慢反应”即可发生，约持续1h完成，故有试剂要求在1min内测定吸光度，排除“慢反应”干扰。 注意事项 3．BCG试剂也可用其他缓冲液如枸橼酸盐或乳酸盐缓冲液。琥珀酸盐缓冲液的校正曲线通过原点，线性好，灵敏度高，为首选推荐配方。 4．叠氮钠有防腐作用。Brij-35可提高蛋白质与染料的结合力及溶解度，提高呈色稳定性，可用其他表面活性剂代替（如吐温-20或吐温-80，终浓度为2ml/L），灵敏度和线性范围不变。 注意事项 5．严重高脂血症，需做标本空白管（血清0.02ml，琥珀酸缓冲贮存液4.0ml），用琥珀酸缓冲贮存液调零，测定标本空白管吸光度，用测定管吸光度减去标本空白管吸光度，计算结果。 评价 1．血清清蛋白测定法主要有色氨酸含量法、染料结合法、电泳法、免疫化学法和电化学测定法。 2. BCG法操作简便、快速，既可手工操作，也能自动化分析，是目前国内测定清蛋白最常用的方法。 3．Vc≤0.4g/L、血红蛋白≤4g/L对测定无影响。 4．本法线性范围为10 g/L~60g/L。 返回实验目录 二、显色时间改变对溴甲酚绿法测定 血清清蛋白结果影响 BCG与清蛋白结合的特异性较低，不但与清蛋白呈色，而且还可与其他蛋白质呈色，其中α1-球蛋白，TRF、Hp最明显。但BCG与不同蛋白质反应速度不同，清蛋白可立即反应（快反应），其他蛋白质反应慢（慢反应）。 实验原理 试剂与器材 同溴甲酚绿法测定血清清蛋白 操作步骤 1. 按表3