副溶血弧菌和溶藻弧菌双重PCR检测方法的建立与初步应用.pdfVIP

第 34 卷第8 期 中国预防兽医学报 Vo l. 34.No.8 2012 年 8 月 Chinese Jouma1 of Preventive Veterinary Medicine Aug. 2012 doi: 1O.3969/j.issn.1008-0589.2012.08.13 副溶血弧菌和溶藻弧菌双重 PCR 检测方法的 建立与初步应用 刘 阳 l 七孔繁德 1· ，徐淑菲 1 ，吴德峰2 ，林立I (1.厦门出入境检验检疫局，福建厦门 361026; 2. 福建农林大学动物科学学院，福建福州 35∞02) 摘 要:为建立同时快速检测海产品中的副溶血孤菌(VP)和溶藻孤菌(VA)的双重 PCR 方法，本研究根据 VP 和 VA 的 ω，xR 基因序列设计针对这两种细菌的两对特异性引物，建立能够快速同时检测这两种细菌的双重 PCR 方法，并对该反应体系的特异性和灵敏度进行检测。结果显示纯培养细菌 VP 和 VA 的检测灵敏度分别为 2.32 x 3 3 10 cfulmL和 2.56 X 10 c伽JmL， 临床病料检测灵敏度分别为 2cfu 和 3cfu; 与构橡峻杆菌、沙门氏菌、美人鱼弧 茵、霍乱孤菌、麦氏孤菌元交叉反应。研究表明本实验方法操作简便快速、特异性强、灵敏度高、稳定性好，并 且经济实惠，值得推广应用。 关键词:副溶血孤菌;溶藻孤菌;双重PCR 申图分类号: S852.61 文献标识码:A 文章编号: 1008-0589(2012)08-0647-04 Establishment and primary application of duplex PCR for detection of Vibrio parahaemolytious and Vibrio alg的olyticus L阳Yangl 气 KONG Fan-de l•, :XU Shu击ïl ， WU De岳ng户， LIN LP (1. Xiamen Entry-Exit ln印刷ion and Quarantine B山回且， Xiamen 361026. China; 2. Anirnal Science College , F可ian Agricu1tural and Fores町Universi纱， Fuzhou 35∞02.αlina) Abstract: In也is study, a dup1ex PCR (dPCR) wωestablished and optimized to detect Vibrio p81在haern叫树-;0ω(VP) and Vibrio alginolyticω(VA) sirnu1taneous1y, two sets of specific primers were designed according ω 由e toxR s吨uence of VP and VA avai1ab1e in GenBank. The results showed that the detection limits ofthe dPCR assay were 2.32 x 103 cfulmL and 2.56 x 103 c缸ImL for VP and V A with p四百 bacteria cu1ture , and 2 cfu and 3 cfu for VP and VA with clinic 臼mples， respective1y. The method possessed a bett町 specificity and no cross-reaction wi也 other enterobac