蝉蜕多糖的分离与纯化.docVIP

蝉蜕多糖的提取 杨青 （聊城大学生命科学学院 山东 聊城 252000） 摘要：为探究蝉蜕多糖的制备方法，在一定温度下利用酸、碱方法, 对干燥洁净的蝉蜕进行脱蛋白、脱钙、脱乙酰等处理, 低温烘干, 获得一定纯度的蝉蜕多糖，并采用酸碱滴定法测定脱乙酰度。实验结果表明，采用该方法制备蝉蜕多糖，蝉蜕多糖的提取率为36%, 脱乙酰蝉蜕多糖得率为22.14%，脱乙酰处理前脱乙酰度为27.25 %，脱乙酰处理后脱乙酰度为95.72%，脱乙酰处理后样品全部溶解于0.1mol.L-1HCl溶液中。 关键词：蝉蜕多糖 制备 脱乙酰 溶解 甲壳素( Chitin) 又称甲壳质、几丁质、聚乙酰氨基葡萄糖,化学名为( 1, 4)-2-乙酰氨基-2- 脱氧-D- 葡聚糖, 是以β-1,4 糖苷键相连的线性生物高分子。甲壳素及其衍生物天然高分子的多功能性, 生物相容性[1] 和生物降解性[2] 是其他人工合成功能高分子无法比拟的, 已在医药保健、污水处理[3] 、纺织工业和化妆品等方面得到广泛的应用。甲壳素广泛存在于海洋节肢动物( 如虾、蟹) 的甲壳和昆虫体壁中，自然界每年生物合成的甲壳素估计有数十亿吨[4]。但是，甲壳素不溶于水、稀酸、碱、乙醇或其它有机溶剂，这就限制了甲壳素的应用。因此，实践应用中，往往需要将甲壳素进行脱乙酰处理，脱乙酰后的甲壳素称为壳聚糖，壳聚糖不溶于水和碱，但溶于稀酸。本文对蝉蜕中的多糖提取及其脱乙酰进行了初步研究。 材料、试剂与仪器 1.1材料：蝉蜕 1.2试剂：盐酸(分析纯）、氢氧化钠（分析纯）、甲基橙（分析纯） 1.3仪器：分析天平、粉碎机、鼓风干燥箱、水浴锅 实验方法 2.1 甲壳素的制备 蝉蜕中的主要成分为蛋白质、碳酸钙和蝉蜕多糖，由于蝉蜕多糖不溶于酸和碱，而蛋白质在碱性条件下水解，碳酸钙在盐酸条件下反应变为可溶的氯化钙，因此利用碱除去蛋白质、酸除去碳酸钙，所得到的固体物主要就为蝉蜕多糖。 2.1.1蝉蜕的处理 蝉蜕拣选清洗除杂3～4 次，反复漂洗，直至水澄清，用蒸馏水冲洗3次。然后将样品放在报纸上摊开，置于60℃鼓风干燥箱中恒温鼓风加热干燥8h，称重后高速粉碎机粉碎，粉碎后样品备用。 2.1.2 脱蛋白 用分析天平准确称取洗净、粉粹、干燥好的蝉蜕8.0g置于250ml锥形瓶中，加入60ml1.5 mol.L-1 NaOH 溶液, 于90℃下水浴1小时。水浴后过滤, 收集固体物, 用蒸馏水洗至中性。 2.1.3 脱钙 向脱蛋白后得到的固体物中加入60ml0.2%HCl溶液，在室温下浸泡40min, 滤取固体, 清洗至中性, 同样条件重复2 次。 2.1.4干燥 将经过脱蛋白、脱钙后所得到的固体物于80℃条件下在干燥箱中干燥至恒重，所得即为蝉蜕多糖。 2.2 蝉蜕多糖的脱乙酰 用分析天平准确称取2.0g上述制得的蝉蜕多糖放入250ml锥形瓶中, 然后加入50ml质量分数为50% 的NaOH 溶液, 于100℃下搅拌反应3h, 反应结束后过滤, 将所得固体洗至中性, 烘干, 即得脱乙酰蝉蜕多糖。 2.3 脱乙酰度的测定 采用聂莉等[5]测定脱乙酰度的方法进行。用分析天平精确称量0.25 g经干燥到恒重的样品3份分别置于250 mL锥形瓶中，分别加25mL0.1 mol.L-1HCl标准溶液，室温下磁力搅拌1h，使其完全溶解，加入指示剂1％甲基橙2—3滴，在磁力搅拌器搅拌条件下用标准0.1 mol.L-1 NaOH溶液滴定过量的HCl，当溶液由红色变为黄色即为终点，根据滴定终点时用去的NaOH的体积，计算壳聚糖的脱乙酰度。对脱乙酰处理前的蝉蜕多糖及脱乙酰处理后得到的脱乙酰蝉蜕多糖都进行测定。 计算方法： NH2%=( C1.V1 - C2.V2)0.016/G( 100- W) ?? NH2% 脱乙酰度%= .100% 9.94% 式中：C1：HCl标准溶液的浓度，mol／L； C2：NaOH标准溶液的体积，mol／L； V1：加入的HCl标准溶液的体积，mL； V2：滴定耗用的NaOH标准溶液的的体积，mL； G：样品重，g； W:样品中水的重，g； 0.016为lmLlmol／L HCl溶液相当的氨基量，g； 9.94％：理论氨基含量。 3、结果 3.1蝉蜕多糖的提取率及脱乙酰蝉蜕多糖的得率 见表一和表二 表一 蝉蜕多糖的提取率 蝉蜕（g） 蝉蜕多糖 （g）