分子生物学（张海红）第二代测序技术.pptVIP

第二代高通量测序技术简介 四大高通量测序平台 Solexa，454 (GS-FLX)， SOLiD和Polonator 测序原理 合成法测序(Sequencing by Synthesis) 连接法测序(Sequencing by Ligation) 454 (GS-FLX) Roche：（2005，2007，2008） 原理：在DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和双磷酸酶的作用下，将每一个dNTP的聚合与一次化学发光信号的释放偶联起来，通过检测化学发光信号的有无和强度，达到实时检测DNA序列的目的。 454 (GS-FLX)流程 1、文库制备：基因组DNA/cDNA片段化处理至300-800bp间，经末端修复与特异性接头连接等修饰后变性处理回收单链的DNA 。 454 (GS-FLX)流程 2、Emulsion PCR：单链DNA文库被固定在DNA捕获磁珠上，乳化，形成油包水的混合物，每个独特的片断在自己的微反应器里进行独立的扩增，回收纯化； 454 (GS-FLX)流程 3、测序反应：携带DNA片段的磁珠被放入PTP板中供测序反应使用。 454 (GS-FLX)流程 4、数据分析：GS FLX系统在10小时的运行当中可获得100余万个读长，读取超过4-6亿个碱基信息 Solexa-Illumina Genome Analyzer