活体生物发光和荧光成像技术应用讲座,.pptVIP

 活体生物发光和荧光成像技术应 用 介 绍 wanchunli@ QQ 1055873363 021 2014年10月28日 仪器结构与组成 NightOWLⅡLB983 视野连续可调，自动聚焦 3种荧光激发光源配件 环状照射装置 鱼尾型照射装置 鹅颈管照射装置 散射光滤光片 90 W 钨灯光源 200 - 1100 nm可选滤光片 祛除宇宙射线和背景 视野校准 定量分析功能 原始数据与处理后数据分开存档（根据GLP规则） 三种图像输出模式 成像原理与特点 目前的活体生物体内成像技术和方向 可见光及荧光成像 --生物发光 （Bioluminescence） 与荧光（Fluorescence） 正电子衍射成像（Positron-Emission Tomography，PET） --放射性标记葡萄糖导入体内，被分裂旺盛组织吸收，常用于检测肿瘤的良恶性 单光子衍射(Single-Photon-Emission Computed Tomography,SPECT) 超声（Ultrasound） -- 物理学方法 计算机断层摄影（Computed Tomography ，CT） --断层扫瞄技术，X-ray的衍生，物理学方法 核磁共振（Magnetic Resonance Imaging ，MRI） --包括功能性核磁共振（Functional MRI，fMRI）, 心血管核磁共振（Cardio-vascular MRI ，cMRI），等等 几种常用活体体内成像技术的比较 标记细胞发光强度与定量分析 小鼠皮下总计1000个 细胞或每mm2 20个细胞可以很容易地被检测到，探测极限是一丛150 – 250个细胞. 在微孔细胞板中少到10 个细胞可以检测到. 如何提高灵敏度 生物发光的应用 肺癌模型 乳腺癌原位接种 原位胰腺癌模型 白血病模型 BCL6 enables Ph1 acute lymphoblastic leukaemia cells to survive BCR–ABL1 kinase inhibition 2011年5月 NATURE U87 脑胶质瘤成像 cancer research 2011,8 骨肉瘤转移机理研究 肿瘤转移 乳腺癌转移实验 利用转基因技术自发肿瘤的研究 抗体药物研究 研究干细胞造血作用 心脏内成像 免疫治疗研究 外源质粒在体内表达 实验性心内膜炎症的抗生素筛选大鼠模型 细菌的感染模式研究 基因治疗载体的构建 A genetically humanized mousemodel for hepatitis C virus infection 体内蛋白质-蛋白质之间的相互作用 LUC N端 与 C端 分开时并不发光 蛋白质A 与蛋白质B 分别与LUC N端 和 C端 连接 两组蛋白由不同的质粒诱导表达 活体动物体内观察细胞凋亡 活体动物细胞及组织特异性基因表达 构建双重标记的细胞株(RENILLA FIREFLY LUCIFERASE), 识别不同底物的发光酶 研究基因的启动子控制 FIREFLY LUCIFERASE 表达, 与兴趣基因平行表达. RENILLA LUCIFERASE 作为内参, 标记细胞数量 荧光和量子点标记的应用 4H9在荷瘤小鼠中的分布 (U87V3) GFP标记的肺癌皮下模型 药物的肿瘤靶向性研究 荧光染料（Cy5.5)标记的探针对肿瘤细胞的识别 量子点标记成像 转基因动物的应用 药物诱导的IL-1β基因表达 荧光素酶基因标记的肿瘤细胞 荧光素酶基因标记的肿瘤细胞 谢谢大家 Thank You 带有 LUCIFERASE 基因的 siRNA 对LUCIFERASE 在体内的表达产生抑制, 证明此方法的可靠性. 将荧光标记的单一造血干细胞植入受射线照射骨髓损伤的老鼠体内，在一些鼠体内干细胞可引发造血系统重组（上图），而在另一些鼠体内（下图）仅出现在部分组织中重组。可以，标记干细胞有几种方法。一种是标记组成性表达的基因，做成转基因小鼠，干细胞就被标记了，从此小鼠的骨髓取出造血干细胞，移植到另外一只小鼠的骨髓内，可以用该技术示踪造血干细胞在体内