蜂毒肽基因在大肠杆菌中的表达、纯化及初步鉴定.pdfVIP

中罔~化药物杂志 Chinese JO lllTUl.l of 8iochemical Phannaceutics 2010 年第 31 卷第 1 期 ·论著· 峰毒肤基因在大肠杆菌中的表达、纯化及初步鉴定 朱文她1 ，田立玲2 ，孙妙国1 ，孙穗军1 (1.吉林大学再生眩学科学研究所生物技术药物教研室，吉林长春 130021 ) 2. 吉林省辉发制药股份有限公司，吉林辉南 1351∞) 摘 要:目的通过 pGEX♂T 原核农达我体表达蜂毒放。方法将人工合成整合了肠激酶作用位点的蜂毒肤基 重组质粮转化 阂，插入载体 pGEX-2T. 构建蜂毒放与谷脱廿肤 S转移酶(GST) 融合农达载体 pGEX-MEL E.coli o B121(DE3)诱导农达，越多破碎简体.sm如PAGE 梭洲安白衣达情况，取超卢J:.清，通过 GST 亲和色谱系统纯化阔的 融合蛋白，路切通过溶JÚL 实验检测Jt:.溶Jn.治性。结果 SDS结果显示，农达了相对分子质量约为 30 侃的融 合蛋白，阔的融合蛋白量约占菌体总蛋白聋的 29.5%0 辈革 W倒tem blot 鉴定，农达的 GST 融合蛋白与 GST 抗体有强 烈的文义反应，说明成功农达了阔的融合簧白。尊且越j岛上清，亲和色谱纯化融合资白，纯成为 95% 。肠激嗨切.ftl 得 到了人」几天然蜂毒妹，测定蜂悉肤回收率为 80% 。结论通过尿被农达系统成功表达给惑肤，具有和天然锋毒相同 的溶血活性。 羡键词:蜂4鲁放;大肠杆篱; *-~;纯化 中阁分类号:Q78 11:献标识码 :A 文章编号:1ω5-1678(2010)01-创阳帽05 Expressi棚，purification and preliminaηidentitication of Melittin in E. coli 1 1 ZHU Wen-l时， TIAN Li-li旷， 5un Miao-nan , 5UN De-jun ( 1 . Department of Bω阳dici7U!， Imtítute of Frontier Medical Scíences , Jílín University , Chα昭chun 13∞21. China; 2. Jílimheng Hu仙 P阳nnac刷ical Co. Ltd .• Huinan 1351∞， China) Abstract: pu叩ose Melittin Wiωexpressed in prokaryotic vector pGEX-2T for production. Methods Melittin gene synthesized with enterokinase digested 册quence ， the gene was cloned into vector pGEX-2T ,and constructed a recombinant plasmid of pGEX-MEL. Then the recombinant vector Wiωintroduced into E. coli BI21(DE3 ) for expression. Fusion protein was purified by affinity chromatogr叩hy. Hemol沪ic a