流动注射菌种筛选系统的建立和应用论文.pdfVIP

M023 流动注射-菌种筛选系统的建立和应用* 宁长发 刘彦 沈薇 孟广荣 杨树林** （南京理工大学生物工程研究所南京 210094 ） 摘 要 利用流动注射技术建立了一套菌种筛选方法和装置—流动注射-菌种筛选（FI-IS ）,系统 使菌种筛选过程中的采样、菌体和杂质脱除、样品稀释、显色反应、控温和测定等过程于同一密 闭流路系统中自动、在线完成。用于产糖脂生物表面活性剂菌株的复筛，实验筛选出一糖脂产量 较高的菌株L-2 1。通过监测L-2 1 菌株发酵过程中表面活性剂产生情况与常规手工方法进行比较， 测定结果令人满意。 关键词 微生物 菌种筛选 生物表面活性剂 流动注射 Abstract A new method and equipment for screening strains, flow inj ection-isolation of strains(FI-IS) system, is proposed in this paper. All the processes, such as sampling , strains and impurities removing, reagent diluting, colorating, temperature -controlling and absorbency determining, etc. are automatically and on-line finished in the same closed system. A Strain of bacteria L-21,which can produce more rhamnolipid biosurfacant, was isolated used FI-IS system, and the course of its metabolize was monitored. Results is satisfied comparing with the routine manual method. Keywords microorganisms，Isolation of strains，biosurfacant ，Flow Inj ection 引 言 菌种筛选过程中的复筛是一个精选的过程，要从数株已知代谢产物或代谢性状的菌株中 筛选出一株性能优良的目的菌株，要经过一系列生长、代谢状况考察才能确定。常规方法的 不足主要表现在以下两点:一是在菌株培养过程中需停机取样，容易造成杂菌污染和实验条 件改变。菌种培养期间振荡培养的短暂停顿甚至会对菌株生产和积累产物的能力造成不可逆 的破坏和减慢[1]；二是测样过程中移液、水浴控温及其它人为操作造成的样品与试剂间物 理混和与化学反应平衡程度的差异，会极大降低测定结果的灵敏度和重现性； 与化学表面活性剂比，生物表面活性剂具有无毒和易降解等优点，在食品加工、化妆品、 医药以及一些与石油相关行业都有着日益广泛的应用。糖脂类生物表面活性剂是目前研究最 多、应用最广泛的一类[2]。本文在研究糖脂类表面活性剂产生菌筛选方法的过程中，借鉴 了流动注射分析技术的基本思想[3]，建立的流动注射-菌种筛选系统 （FI-IS 系统）能够在样 品与各试剂物理混合和化学反应不平衡的情况下完成样品测定，方便的用于菌株发酵过程的 * 南京市科技局资助项目（No.99221 ） ** 联系人。电话：025；E-mail:yshulin@mail.njust.edu.cn 连续在线监测。本系统用于产生物表面活性剂菌株的复筛，具有在线、快速的优点，灵敏度 和重现性高。从而具有节省样品和人力，测定易于实现自动化及测定过程不影响菌株生长条 件等优点。 1 材料与方法 1.1 主要设备和仪器 LZ-1000 型组合式流动注射分析仪（沈阳肇发自动分析研究所）；FIA-T01 多用高精度温控 器（中国科学院信通集团科仪公司）； 722 型可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）； QHZ-98A 型全温度振荡培养箱（江苏太仓华美生化仪器厂）；无菌操作台（苏净集团安泰公 司）；DT-102G 型全自动界面张力仪（山东淄博）；泵管和管道选用聚四氟乙烯材料（日本产）； 台式自动平衡记录仪（上海大华仪表厂）及过滤装置（自