牛黄酸对拟痴呆模型小鼠学习记忆及胆碱能受体的影响论文.pdfVIP

牛黄酸对拟痴呆模型小鼠学习记忆及胆碱能受体的影响 叶翠飞 张兰 张丽 李林2 (首都医科大学宣武医院药理研究室 北京脑老化重点实验室北京100053) 摘要 目的 探讨牛黄酸对拟痴呆模型小鼠学习记忆及对其脑组织M受体结合力的的影响 方 法 设立东莨菪碱致学习记忆障碍模型组及空白对照组 阳性对照药 匹拉西坦 组 牛黄 酸小 中 大剂量组 分别灌胃给药 于第5天 除空白对照组腹腔注射生理盐水外 其它各 组注射东莨菪碱1mg/kg20分钟后进行Morris水迷宫测试 5d后对脑组织进行M-受体结合力 测定 结果 在行为学实验中 牛黄酸各剂量组游出时间与模型组相比有明显差异 P0.05 并可以提高模型小鼠胆碱能M受体的数目 结论 牛黄酸对东莨菪碱所致小鼠学习记忆障碍及 M受体有一定的改善作用 关键词 牛黄酸 学习记忆 痴呆模型 有文献报道牛磺酸 Taurine在哺乳动物中枢神经系统中特异性的分布于大脑皮质 海 马和小脑等区域 它有促进神经系统生长发育 增殖分化 增强大鼠学习记忆 延缓衰老的 [1.2] 作用 本实验旨在通过用M 受体阻断剂氢溴酸东莨菪碱造成记忆缺损模型 来观察牛磺 酸对东莨菪碱致小鼠学习记忆障碍的影响 1材料与方法 1.1动物 昆明小鼠 雄性 25 2g购自中国药品生物制品鉴定所实验动物中心 批准号 2000-017号 1.2药品与试剂 牛黄酸 Taurine阳性对照药 匹拉西坦 北京市曙光制药厂产品 京卫药准字 1996 第138050号 氢溴酸东莨菪碱注射液 Scopolamine hydrobromide为上海禾丰制药有限 3 公司产品 沪卫药准字 1995第010043号 H-QNB44Cimmol购自 公司 1.3主要仪器 Morris水迷宫系中国医学科学院药物研究所研制 FJ107P型液体闪烁仪由西安262厂生产 1.4实验分组 将小鼠随机分为 空白对照组 模型组 东莨菪碱腹腔注射组 阳性对照 药组 东莨菪碱 匹拉西坦0.7 g/kg/d,东莨菪碱 牛黄酸大剂量 2g/kg/d中剂量 0.7g/kg/d小剂量 0.3g/kg/d各组分别给药灌胃每日一次 连续5 d正常对照 及模型组分别给予溶剂 1.5造模方法[3] 进行Morris水迷宫测试前 于第5天各组灌胃给药后30分钟 除正常对照 组注射等量的生理盐水外 其余各组小鼠均予腹腔注射东莨菪碱1mg/kg. 1.6 Morris水迷宫测试[4] 各组于造模后20分钟进行水迷宫测试 Morris水迷宫主要由一个圆形水池和自动录象及 分析系统两部分组成 水池高70cm直径100cm有机玻璃站台放置其中一个象限中央 水温 控制在25 2 C在池中注水并加适量奶粉使水呈乳白色 每只小鼠头部涂以黑色 水池 上方置一摄像头采集小鼠游泳轨迹 第一天训练2次 入池位置为站台所对象限及所邻象限 于象限边1/2弧度处将小鼠头朝池壁入水 120S未找到站台者 将其引致站台 放置30 S引 导其学习与记忆 第2 3和4天重复测试 数据采集和处理均由有图像自动监视和处理系统完 成 1.7组织样品处理 各组常规灌胃给药后30分钟 除正常对照组注射等量的生理盐水外 其 余各组小鼠均予腹腔注射东莨菪碱1mg/kg.20分钟后,冰浴下迅速取出全脑分为左右半脑 置 液氮中速冻后 -70保存 1.8小鼠脑组织M-胆碱能受体结合实验[5] 将小鼠脑组织按1:10W/V加入0.05M PBS(pH7.4)缓冲液 冰浴下匀浆 4 离心 12000r.30min弃去上清 将沉淀冻于-70此即为脑突触粗膜 简称突触膜 次日再将突触 膜洗涤2次 调整蛋白浓度为1-2g/L取100l膜稀释液加入200lPBS在非特异结合管加 3 -4 入膜量100l及PBS100l 每管加入7.58nmol/L0.1uciH-QNB及10mol/l的Atropine每个 样品做两个平行管 25孵育60min反应结束后 用20ml预冷的50mMPBS分三次洗涤反应后的 样品 付压抽滤于纤维素膜上 将滤膜置于闪烁杯中 加入5mlTriton甲苯闪烁液于液体闪烁 仪上测定CPM值 计算公式 特异性结合= CPM-非特异结合CPM每管配基的fmol数/总计数