第4章4节重组DNA分析导入受体细胞.pptVIP

第四章 基因和基因组 §4. 4 目的基因与载体DNA的连接 一、插入灭活法 将外源性基因插入选择性标记中使其失活的连接法称为插入失活法 缺点：重组连接效率低 片段方向不定 二、定向克隆发 将目的基因按照正确方向插入载体的方法 用两种不同的限制酶同时消化一种特定的DNA分子 产生两种黏性末端，定向插入、连接 平末端连接策略： 同聚物加尾法、衔接物连接法、接头连接法 §4. 5 重组DNA分子导入受体细胞 一、？？什么是受体细胞 2. 真菌细胞 低等真核生物，具有真核生物基因结构、表达调控体系，具有真核的蛋白折叠、加工与分泌系统 酵母菌 a.结构最简单的真核生物， 遗传背景较为清楚 b.蛋白翻译后修饰加工系统 c.不含毒素 d.易培养 e.可分泌 3. 植物细胞 具有纤维素参与组成的坚硬细胞壁 原生质体转化(纤维素酶处理) 基因枪或农杆菌直接转化 植物细胞的突出优点: 细胞具有全能性 4. 动物细胞 动物细胞的优点： 转化和转染 转化——将携带某种遗传信息的外源性DNA分子引入宿主细胞，通过DNA质检的同源重组作用，获得具有新遗传性状生物细胞的过程 转染——直接吸收以温和噬菌体或病毒DNA为载体所构成的重组DNA分子的过程 转染是转化的一种特殊形式 2.限制性核酸内切酶分析法 Ori H