PTTG、VEGFC 的表达及微淋巴管密度与非小细胞肺癌临床病理特征的关系_1.docVIP

PTTG、VEGFC 的表达及微淋巴管密度与非小细胞肺癌临床病理特征的关系 作者：尹秋伟 郭旭峰 胡国强 赵健 李希波 【摘要】 目的 检测非小细胞肺癌（nonsmall cell lung cancer，NSCLC）、癌旁组织及肺良性病变组织中垂体瘤转化基因（pituitary tumor transforming gene,PTTG）及血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor，VEGFC)的表达和微淋巴管密度(lymphatic microvessel density，LMVD)值，并探讨三者间的相互关系。 方法 应用 实时荧光定量 PCR 和免疫组织化学方法检测非小细胞肺癌组织中 PTTG、VEGFC mRNA 和蛋白及 LMVD 的表达， 分析 PTTG、VEGFC 及 LMVD 与 NSCLC 临床病理特征的关系，以及 PTTG、VEGFC 和 LMVD 三者之间的相互关系。同时，对随访资料进行生存分析，绘制生存率曲线，探讨 PTTG、VEGFC 对肺癌患者预后的 影响 。结果 PTTG、VEGFC mRNA 和 LMVD 值在不同性质的肺病变组织中的表达均有显著性差异(P均＜005)，在不同年龄、性别、是否吸烟、肿瘤大小、组织学类型及分化程度间无显著性差异(P均＞005)，在TNM分期、淋巴结转移与否及预后组间有显著性差异(P均＜005)。PTTG、VEGFC 蛋白表达在淋巴结转移与否及预后组间有显著性差异(P均＜005)。生存率曲线显示 PTTG、VEGFC 高表达者生存时间均短于低/无表达者(P=0030，0027，n=65)。PTTG 在肺癌组织中的表达与 VEGFC、LMVD 密切相关，随着 PTTG 强度增加，VEGFC 分级及 LMVD 值亦增加。结论 PTTG、VEGFC 的过度表达促使肿瘤微淋巴管的生成，进而促进了肿瘤细胞淋巴结转移。PTTG 和 VEGFC 表达可作为判断 NSCLC 生物学行为及肺癌患者预后的良好指标，VEGFC 有望成为肺癌抗淋巴管 治疗 的新靶点。 【关键词】 垂体瘤转化基因；血管内皮生长因子C；微淋巴管密度；实时荧光定量PCR 　　垂体瘤转化基因(PTTG)是1997年〔1〕 被发现并证实与细胞增殖、分化和凋亡有关的癌基因。血管内皮生长因子(VEGF)C 被认为是迄今发现的唯一特异性新生淋巴管刺激因子,可促进肿瘤微淋巴管生成及肿瘤细胞向区域淋巴结转移。有 研究 〔2〕 显示 PTTG 可通过促进 VEGFC 的过度表达，促使肿瘤细胞发生淋巴结转移。国内外已报道 PTTG 在食管癌、胃癌和卵巢癌等多种肿瘤中高表达，但 目前 尚未见对 PTTG 在肺癌中表达研究的报道。以往关于 VEGFC 的研究多为蛋白半定量分析，本实验结合免疫组化应用实时荧光定量 PCR 对非小细胞肺癌(NSCLC)组织中 PTTG、VEGFC 的表达进行精确定量分析，并检测微淋巴管密度(LMVD)的表达情况,旨在探讨它们与 NSCLC 临床病理特征及预后的关系。 　　1 材料与方法 　　11 研究对象 　　收集65例 NSCLC 组织，均来自手术切除且经病理科常规病 理学 检查证实。男女为4025，年龄43～78（中位数588）岁。依据1997年新的修订标准进行TNM分期，其中期7例，期28例，期26例，期4例；按病理形态学分为鳞状细胞癌36例，腺癌26例，大细胞癌3例；按分化程度分为高分化5例，中分化18例，低分化42例；按有无淋巴结转移分为有淋巴结转移37例，无淋巴结转移28例。所有患者均为原发性 NSCLC，术前均未接受过化疗或放疗等任何治疗。同时取65例配对的癌旁组织和20例肺良性瘤样病变组织(包括结核球10例，错构瘤4例，炎性假瘤4例，肺纤维组织细胞瘤1例，肺隐球菌感染1例)。癌旁组织为距肿块边缘5 cm以上的正常组织。肺癌组织和肺良性病变组织均取自肿块中央非坏死部分。标本经10％甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋。65例患者无住院期间死亡，随访日期以患者手术日期起 计算 ，术后随访至2006年5月。 　　12 实验用品 　　RNAiso Reagent、SYBR ExScriptTM RTPCR Kit(DRR053S) 均购自TaKaRa公司，引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成，其他各种化学试剂均为进口或国产分析纯。采用ABI PRISM 7000 实时 PCR扩增仪。兔抗人多克隆抗体 PTTG、VEGFC、VEGFR3及免疫组织化学试剂盒PV9000均购自北京中山生物技术公司。 　　13 实验方法 　　131 实时荧光定量 　　1311 总RNA的提取 　　每100 mg组织匀浆后，加入TRIzol Reagent 1 m