东北农大生物化学课件5核酸化学.ppt

* * * * * * * * * * 末端终止法——Sanger 2’，3’双脱氧核苷三磷酸（ddNTP）是DNA合成链延伸的抑制剂。 (二) DNA的化学法测序 DNA酶法测序自动化 使用4种荧光素标记的双脱氧核苷酸，毛细管电泳和激光扫描技术使测序自动化，一个泳道一次可测大约1000个核苷酸，测序已成为可以快速完成的常规技术。人类基因组测序已经完成，多态性的研究和功能基因组学已经成为研究的热点。 由于测序仪在一个泳道只能准确测出几百个核苷酸，对于长DNA, 只能将其切成小段再测序，为了组装，需要确定足够多的标记位点。 常用遗传图、转录图、物理图、序列标签位点(STS)、表达序列标签(EST)等方法确定标记位点。 限制性酶切位点分析是绘制物理图的常用方法 (三) RNA的测序 1.RNA的测序可以用4种特异性的酶切割（从胰脏提取的RNase A水解嘧啶核苷酸的磷酸二酯键，米曲霉中提取的RNase T1水解鸟苷酸的磷酸二酯键，黑粉曲霉中提取的RNase U2水解腺苷酸的磷酸二酯键，多头黏菌中提取的RNase Phy Ι水解A、U、G三种核苷酸的磷酸二酯键）,凝胶电泳分离，用类似蛋白质序列分析的方法推断核苷酸序列。 2.也可以用化学试剂断裂RNA链，用类似DNA化学测序的方法推