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菠菜色素的提取和理化性质研究 第六组 第1小组 摘 　 要 研究了菠菜叶绿素的提取条件及其理化性质。结果表明:在丙酮、 乙醇及丙酮:乙醇 = 1∶ 1的混合液中易于提取该色素在碱性条件下对热稳定 ,对光不稳定关键词:叶绿素;提取方法;性质. 1 　 实验部分 1.1　 试剂和仪器 原料:菠菜购自农贸市场 ,将其去梗洗净晾干备用 试剂:95 %乙醇 ,丙酮 ,石油醚 ,NaOH等均为AR级 仪器:723可见光分光光度计 ,上海第三分析仪器厂;RE— 52型旋转蒸发器;SHB — D循环水多用真空泵 ,巩义英峪仪器厂;常用玻璃仪器. 1.1.2　 实验方法 1.2.1　 提取剂的选择 取洗净晾干的菠菜叶10 g切至3～10 mm大小 ,用100 mL 不同的溶剂室温浸泡24小时 ,结果如表1所示: 1.2.2　 提取材料粒度的选择 取10 g菠菜叶切碎和不同的溶剂(如表1所示) 40 mL 分两次研磨1首先把菠菜叶放入研钵中 ,加 20 mL 溶剂研磨后抽滤 ,滤渣再用20 mL 溶剂混合研磨抽滤 ,合并两次滤液1结果如表2所示: 1.2.3　 提取温度的选择 取两份相同量(10 g)的菠菜叶 ,用10倍量的溶剂(100 mL)采用不同的温度提取 ,结果比较如表3 : 1.2.4　 热稳定性 取不同pH值(7 ,9 ,11)的色素溶液(乙醇∶ 丙酮 = 1∶ 1的混合液按1∶ 20的比例用乙醇稀释 ,简称待试液 Ⅰ)各五份 ,依次在不同温度下恒温加热1 h ,测定其吸光度并目视颜色变化. 1.2.5　 光稳定性 将待试液 Ⅰ 分取三份 ,每份50 mL 装入无色透明的玻璃瓶中 ,调pH = 7 ,9 ,11 ,放置于室温向光处 ,定时测定吸光度并观察颜色变化. 1.2.6　 耐氧化还原性 配制1 %的NaHSO3 和3 %和 H2O2 ,按不同的剂量加入10 mL 待试液 Ⅱ(混合液按1∶ 3 的比例用乙醇稀释)中 ,分别在不同时间测定吸光度. 1.2.7　 金属离子对色素的影响 分别配制1 %的 KCl、 NaCl、 CaCl2、 MgCl2、 BaCl2、 AlCl3、 FeCl2、 FeCl3 溶液 ,分取十支试管加入5 mL 待试液 Ⅰ,依次加入等量的上述溶液 ,测其吸光度并观察其颜色的变化. 1.2.8　 食品添加剂对色素颜色变化的影响 配制相同浓度的食盐、 苯甲酸及蔗糖溶液 ,分别加入等量的待试液 Ⅰ中 ,30 min 后测其吸光度 ,分析它们对色素的影响. 2 　 结果与分析 2.1　 色素的光谱特性 取1 %色素石油醚溶液(醇提取液减压浓缩后得绿色粉末用石油醚溶解)用分光光度计在室温下测定吸光度(石油醚作 参比 ,比色皿厚度1 cm)如图11由吸收曲线可以看出 ,该色素在可见光区的最大吸收波长为435 nm. 2.2　 最佳提取条件的确定 由表2可以看出 ,研磨法得到的提取液普遍浑浊 ,且费时费力 ,所以材料粒度选择 3～10 mm即可 ,提取温度以室温为宜. 提取剂选择95 %乙醇为好(重蒸工业酒精也可) ,混合溶剂效果也不错 ,但考虑到丙酮的价格和毒性残留 ,实用价值不大。从图2的吸收光谱可以得出上述结论. 2.3　 热稳定性 将不同pH的色素溶液(待试液1 )分别在不同温度下恒温1 h ,选定435 nm波长测其吸光度 ,结果见表4 : 2.4　 光稳定性 实验结果如表5所示 2.5　 叶绿素在不同酸碱条件下的变化 将新鲜菠菜洗净去梗 ,然后将处理好的原料样品分别及时投入沸腾状态的不同pH值的水溶液中 ,进行煮沸实验 ,观察其色泽变化情况.实验结果如表6所示 　　 实验表明 ,pH值越低变色越快.当pH值逐步调至中性 (pH = 7)时 ,由于植物细胞受热膨胀释放出有机酸 ,样品仍 然会变色.直到 pH = 7. 5 (略偏碱性时) ,叶绿素才是稳定 的.但是pH过大时容易造成植物细胞组织软化 ,而且碱使 VC和VB 遭到严重破坏 ,破坏了食品的重要营养价值 .图 3 是不同pH值时叶绿素的吸光度(混合液用石油醚萃取后稀 释20倍作为测定液.) 2.6　 耐氧化还原性 　　 由表7和表8可知 ,H2O2 和NaHSO3 对色素的影响较小 ,叶绿素具有一定的耐氧化还原的能力 2.7　 金属离子对色素的影响 实验结果表明 ,K+、 Na+、 Ca2 +、 Ba2 +离子加入色素溶液中 ,吸光度略有改变 ,但目视色素溶液的颜色几乎无变化;Mg2 +、Al3 +、 Fe2 +会使色素溶液稍变浑浊 ,且 Fe2 +使绿色溶液变浅 ,F