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光学显微镜基础 奥林巴斯（中国）有限公司 成都分公司 金 凯 © OLYMPUS Soft Imaging Solutions 光学显微镜的分类 按显微镜光路区分： 1、正置显微镜切片标本、组织 2、倒置显微镜活细胞 3、体视显微镜（解剖显微镜） 大体标本 © OLYMPUS Soft Imaging Solutions 按显微镜观察方式区分： 1.明场显微镜 2.暗场显微镜 3.相差显微镜 4.偏光显微镜 5. 微分干涉显微镜（DIC） 6. 浮雕相衬显微镜（RC） 7.荧光显微镜 © OLYMPUS Soft Imaging Solutions (一)明场显微镜 常规观察方式 应用领域： 常规镜检、病理、染色标本 优点： 视野亮度高、均匀， 应用范围广， 操作简单，价格低， 局限： 透明标本对比度低， 标本没有立体感 © OLYMPUS Soft Imaging Solutions (二)暗场显微镜 1 原理 丁道尔(Tyndall)现象，微粒对斜射光反射或衍射 ，增大了人眼可见性。 2 特点 观察到极其微小物体，分辨率可达0.02 ~ 0.004 um (明场0.2um)—”超显微“。 3 局限 只能观察到物体存在、运动和外部形态 不方便调节 标本要求高（灰尘、盖片、载片） © OLYMPUS Soft Imaging Solutions (二)暗场显微镜 4 暗场显微镜应用： 检测微小粒子、细菌形态观察、细菌记数 CDC 用于检测钩端螺旋体 © OLYMPUS Soft Imaging Solutions （三）相差显微镜 1 原理 利用被检物体的光程（折射率x 厚度）差进行镜检，即利用 干涉现象，将相位差变为人眼可以分辨的振幅差 1935年荷兰物理学家泽尔尼克创造了相衬显微术， 他为此在1953年获得了诺贝尔物理学奖。 © OLYMPUS Soft Imaging Solutions (三)相差显微镜 2 特点 鉴定活体细胞最实用、最经济的方法 3 局限 需要光强高 标本不能太厚(5~10um) 盖片、载片需符合标准 每个物镜需要对应相应的相差环 © OLYMPUS Soft Imaging Solutions (三)相差显微镜 4 应用： 无色透明活体标本的细微结构，检查,鉴定 活体细胞(培养细胞,分离细胞) © OLYMPUS Soft Imaging Solutions （四）偏光显微镜 1 原理 依据波动光学原理观察和精密测定标本细节,或透明物体改变 光束的物理参数,以此判别物质结构的一种显微镜 各向同性：单折射体，光性质不因照射方向而改变，普 通气体、液体、非结晶固体等 各向异性：双折射体，光速度、折射率、吸收和振动面 、振幅随照射方向不同，晶体、纤维等 © OLYMPUS Soft Imaging Solutions （四）偏光显微镜 2 应用： 矿物质、化学物品鉴别 鉴别纤维、染色体、淀粉粒、细 胞中晶体 植物病理检验 鉴别骨骼、牙齿、胆固醇、神经 纤维、横纹肌和毛发等 © OLYMPUS Soft Imaging Solutions （五）微分干涉显微