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第七章 细胞工程制药 第一部分、微生物细胞工程 第二部分、植物细胞工程 第三部分、动物细胞工程 第四部分、生物反应器以及工作原理 第五部分、动物活体组织和器官培养器 第一部分、微生物细胞工程 一、工业上常用微生物 二、工业微生物营养源 三、工业微生物培养基的配制 四、工业微生物的筛选要求 五、微生物细胞培养方法 六、微生物原生质体技术 七、微生物工程的实际应用 八、 酵母基因工程 一、工业上常用微生物 1、细菌 （1）枯草芽孢杆菌-------产蛋白质、淀粉酶 （2）乳酸杆菌------产乳酸 （3）梭状芽孢杆菌--------产丙酮、丁醇 （4）醋酸杆菌-------产醋酸 （5）北京棒状杆菌--------产味精 （6）产氨短杆菌--------产氨基酸、核苷酸 2、放线菌 （1）龟裂链霉菌-------产链霉素 （2）金黄色链霉菌-------产金霉素 （3）灰色链霉菌-------产链霉素 （4）红链霉菌-------产红霉素 （5）红小单孢菌-------产庆大霉素 （6）委内瑞拉链霉菌--------产氯霉素 （7）卡那链霉菌--------产卡那霉素 3、酵母菌----用于生产饮料酒、酒精、甘油、柠檬酸、富马酸、脂肪酸、单细胞蛋白、酵母类酶、乳糖酶，也用于提取RNA、核苷酸、CoA。 4、霉菌 （1）黑曲霉-------生产淀粉酶、蛋白酶、柠檬酸、葡萄糖酸 （2）米曲霉-------生产酱油 （3）产黄青霉--------产青霉素 （4）展开青霉-------产灰黄霉素 （5）米根霉-------制曲、生产乳酸 二、工业微生物营养源 1、碳源 （1）淀粉水解物---------谷物、马铃薯、红薯、木薯淀粉水解产物。 （2）含糖类物质------麦芽糖、糖蜜、乳精、玉米浆。 （3）工业植物油-------橄榄油、玉米油、亚麻子油、棉籽油、黄豆油。 （4）其它物质-------黄豆粉、醇类、简单有机酸、石油、天然气。 （5）纤维素类------秸杆、玉米蕊、稻草、木材、麦草。 2、氮源 无机氮-------铵盐、硝酸盐、氨气、硫酸铵。 有机氮------氨基酸、蛋白质水解物、尿素、黄豆粉、花生粉、鱼粉、棉籽粉、玉米粉、酒糟水、屠宰场废水。 3、无机盐 KH2PO4 K2HPO4 NaH2PO4 MgSO4 MnSO4 FeSO4 KNO3 4、维生素----在天然氮源及碳源中均含有多种维生素，在培养基中无需添加。 三、工业微生物培养基的配制 1、工业培养基的一般要求 （1）单位重量培养基的产物或菌体生成产量应尽可能高。 （2）菌体或产物浓度应尽可能大。 （3）不引起不良反应。 （4）质量稳定、易于获得。 （5）发酵过程易于通气、搅拌，产品易于回收、三废少。 2、培养基配制原则 （1）营养成份配比应适当，尤其是C/N比例应附合要求。C/N比过小，菌体生长过快，菌体容易衰老。C/N比过大，菌体生长缓慢。 （2）渗透压应适合。 （3）PH值应适合，常用磷酸缓冲液来维持PH值。 （4）氧化还原电位应附合要求，常在培养基中加入巯基乙酸钠、Na2S、Na2S2O3、抗坏血酸来稳定电位值。 四、工业微生物的筛选要求 （1）菌种应具有稳定而高产的遗传特征 （2）菌种应具有搞噬菌体的能力 （3）发酵过程的泡沫量少 （4）需氧量低 （5）底物转化量高 （6）对培养基中的特定物质应具有较强的耐受力 （7）可以采用廉价的培养基进行培养 （8）最适温度较高，以降低设备冷却费用 （9）菌种的基因具有可操作性和修饰性 （10）产品容易从发酵液中回收 五、微生物细胞培养方法 1、固体培养（1）浅盘培养（2）转桶培养（3）厚层通风培养 2、液体培养根据培养物厚度可分为（1）液体表面培养法（2）液体深层培养法根据投料方式可分为（1）分批培养法（2）分批补料培养法（3）连续培养法 六、微生物原生质体技术 1、原生质体的定义----原生质体是除去细胞壁的裸体细胞，但是却仍然保持着完整的细胞遗传特性和生理生化特征，并且在适当条件下仍能够再生细胞壁而形成完整细胞。 2、原生质体的制备 3、原生质体的融合技术 4、原生质体融合实例---细菌原生质体融合 2、原生质体的制备 （1）细胞壁的脱除 脱除细胞壁的方法有酶法、机械法。 常用酶法脱除细胞壁，因为酶法除细胞壁有利于提高原生质体的存活率。常用的酶有----溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶、壳多糖酶、酵母裂解酶、溶解酶、溶球菌素。 为了提高酶的消化效果，常常在培养基中加入细胞壁合成抑制剂进行预处理。常用的抑制剂有----甘氨酸、蔗糖、青霉素、a-脱氧葡萄糖。 （2）原生质体的特性 原生质体对于溶液和培养基渗透压特别敏感，必须保存在高渗和等渗溶液中才能存活。否则就会