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基因工程的基本内容 实例：转基因抗虫棉 基因工程概念 基因工程：在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出所需要的基因产物。 基因工程概念 基因工程：在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出所需要的基因产物。 * * * * Gene engineering 抗虫棉 普通棉 想一想：基因工程培育抗虫棉的简要过程 苏云金芽孢杆菌 毒蛋白基因 毒蛋白 杀死害虫 棉花细胞 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基 因 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 人类需要的基因产物 DNA分子水平 1、目的性强（定向改变生物性状） 2、育种周期短 3、克服远源杂交不亲和障碍 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基 因 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 人类需要的基因产物 DNA分子水平 1、基因的剪刀——限制性内切酶 2、基因的针线——DNA连接酶 3、基因的运输工具——运载体 “ ” 1、“分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 （1）来源： （2）作用： 主要从_________(如细菌)中分离出来 （4）举例： 原核生物 _____和切割DNA分子内__________ 识别 特定的核 苷酸序列 即:一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子。 （3）特点： 特异性 判断：所有的 限制性核酸内切酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列？ 专一性 限制酶 例如：大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 切割具体部位: 磷酸二酯键 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 黏性末端 什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 2、“分子缝合针” ——DNA连接酶 连接部位： 磷酸二酯键 梯子的扶手 不是氢键 梯子的踏板 3、“分子运输车” ——运载体 作用一：作为运载工具，将外源基因(抗虫基因)转移到受体细胞(棉花细胞)中去。 作用二：利用运载体在受体细胞(棉花细胞)内，对外源基因(抗虫基因)进行大量复制。 质粒、噬菌体和动、植物病毒 3、“分子运输车” ——运载体 常用的运载体： 质粒是一种能够自主复制___________DNA分子，在细菌中以独立于染色体之外的方式存在是一种特殊的_______。 质粒存在于许多_____以及_______等生物中。最常用的质粒是________的质粒。其中常含有抗生素___________。 小型双链环状 遗传物质 细菌 酵母菌 大肠杆菌 抗性基因 大肠杆菌质粒的分子结构示意图： DNA 大肠杆菌细胞 质粒 目的基因插入位点 复制原点 氨苄青霉素抗性基因 “标记基因” 有切割位点 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有标记基因的存在，将来可用含青霉素的培养基鉴别。 运载体需具备的条件: 1、能够自主复制并稳定地保存。 2、具有一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 3、具有标记基因，便于进行筛选。 4、对受体细胞无害。 三、基因工程基本操作的四个步骤 1、提取目的基因 2、目的基因与运载体结合 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 * * *