抗凋亡基因Bag-1和Bcl-2在结肠癌组织的表达及相互关系的研究.docVIP

抗凋亡基因Bag-1和Bcl-2在结肠癌组织的表达及相互关系的研究 作者：孙念峰　张建良　王国斌 【摘要】 目的：研究抗凋亡基因Bag-1和Bcl-2在结肠癌组织中的表达及意义，并探讨二者之间的关系。方法：应用免疫组织化学SABC法（链霉亲合素-生物素-过氧化物酶复合物法）对128例结肠癌组织及20例正常结肠组织中Bag-1和Bcl-2基因的表达进行检测。结果：Bag-1和Bcl-2在结肠癌中的表达与结肠癌病理类型、肿瘤直径、浸润深度及有无淋巴结转移无关，但Bag-1与病理分级、远处转移、Dukes分期及预后密切相关（P0.05）,而Bcl-2与这几项临床病理因素无明显相关性（P0.05）；Bag-1和Bcl-2在结肠癌的发生 发展 过程中呈正相关（r=0.475）。结论：结肠癌组织中有不同水平的Bag-1和Bcl-2蛋白的高表达，两者相互作用并可以作为结肠癌早期筛选的一项指标，对疾病的预后有重要意义。 【关键词】 大肠肿瘤· Bag-1·Bcl-2·细胞凋亡 【ABSTRACT】Objective: To investigate the expressions of Bag-1 and Bcl-2 in colorectal cancer and evaluate thEir clinical significance. Methods: Bag-1 and Bcl-2 expressions were studied by immunohistochemical Streptavidin-Biotin-Peroxidase Complex (SABC) method in 64 samples of colorectal cancer tissues, 10 normal colorectal tissues. Results: Bag-1 was positively related to the tumor grade, distant metastasis, stages of Dukes and prognosis, but was not related to the pathological cell types, tumor diameter, depth of invasion and lymph node metastasis. Bcl-2 was 　　结肠癌是人类胃肠道最常见的恶性肿瘤之一，且发病率有逐年上升的趋势。细胞凋亡障碍是肿瘤发生的重要机制之一，目前研究表明凋亡是一个受多基因控制的过程［1］。Bag-1是最近发现的一种多功能结合蛋白，具有与抗凋亡基因Bcl-2相互结合、相互影响从而促进细胞抗凋亡的能力［1-4］。Bag-1在肿瘤发生发展中的作用已成为国内外研究的热点问题之一。本研究采用免疫组织化学法检测Bag-1和Bcl-2在结肠癌组织中的表达情况，并就其临床意义及相互关系进行初步探讨。 1　资料与方法 1.1　一般资料　收集2004年1月—2007年12月手术切除的结肠癌石蜡包埋组织块128例，为华中科技大学同济医学院附属协和 医院 病理科存档标本91例和山东大学第二附属医院病理科存档标本37例，均经4%多聚甲醛灌注固定，常规石蜡包埋连续切片，厚约5 μm。年龄37～74岁。按世界卫生组织（WHO）病理分级，腺癌92例（其中高分化腺癌36例，中分化36例，低分化20例），黏液癌20例，未分化癌16例。按Dukes临床病理分期，A期44例，B期38例，C期28例，D期18例。同时选择20例正常结肠组织石蜡标本作为对照组。 1.2　实验试剂　主要试剂有兔抗人多克隆 Bag-1 抗体（美国Santa Cruz公司），兔抗人Bcl-2抗体和链霉亲合素-生物素-过氧化物酶复合物（SABC）免疫试剂盒（北京中山生物制品公司）。 1.3　实验方法　采用常规SABC法（按试剂盒说明书方法）测定Bag-1和Bcl-2的表达， 抗Bag-1的工作浓度1：50，生物素化单抗和SABC试剂的工作浓度均为1：100。石蜡组织连续切片5 μm ，载玻片防脱片处理，常规脱蜡至水。石蜡切片经热抗原修复，滴加正常山羊血清封闭，室温20 min，滴加1：50抗Bag-1或Bcl-2抗体，4℃孵育过夜，次日滴加生物素化山羊抗兔IgG，20～37 20 min，再滴加SABC试剂，20～37 20 min，PBS清洗 5 min × 4次，3-3-二氨基联苯胺-4盐酸盐（DAB）室温显色20 min，苏木精复染，脱水，透明，封片。以PBS代替一抗作阴性对照，以已知阳性反应片作阳性对照。 1.4　判定标准　Bag-1和Bcl-2皆以细胞质、细胞核棕黄色为阳性。随机观察5个视野， 计算 其平均数，每个视