2011酶工程第八章酶的定向进化.pptVIP

酶工程 第八章 酶的定向进化 概述 定向进化的突变技术 定向进化的筛选技术 定向进化的应用 应用过程对酶的要求  在酶催化过程的研究和应用过程中，人们总是期望：1 酶的活力和稳定性越高越好，2 能接受自然界中不存在的各种底物。3 具备良好的催化性能能在非水溶剂等特殊条件下进行催化反应， 天然酶应用过程中出现问题（改造动机）1 天然酶的稳定性差、活性低使催化水平很低、缺乏有商业价值的催化功能；2 越来越多的情况需要一些酶催化很多在自然界中并不存在的各种底物来完成特定的反应过程 天然酶-工业酶之间架起桥梁 常规育种方式是对自然进化的一种模仿 随机突变+定向选择＝目标突变体 从目前的情况来看，具有新功能和特性的酶可以通过：传统方法：从大量未知的自然种系中寻找；（工作量大）人工物理化学突变基因；（突变部位难控制）酵母细胞的融合杂交；（适用面窄）现代方法：对基因进行体外定向操作，实施突变，主要包括理性设计和非理性设计 第二节定向进化的突变技术 易错PCR技术(error prone PCR) DNA改组(DNA shuflling) 随机引导重组(RPR) 交错延伸技术(StEP) 过渡模板随机嵌合生长(RACHITT) RAISE突变 饱和定点突变 1 易错PCR（error-prone PCR) 原理:通过降低