westernblot-蛋白质印迹.pptVIP

操作步骤 5.将转移池中注满电转液，将转移槽置于冰水中，打开电源，转移电压：长X宽X0.8，1-2小时 操作步骤 检测 1.封闭：将膜小心取出后用蒸馏水冲洗，放入封闭液（3%的BSA）中封闭1小时，同时将胶染色 2.洗涤：用洗涤液洗涤3—5次，每次10分钟。 3.结合一抗：用1%的BSA封闭液10000倍稀释一抗，37度孵育1小时 4.洗涤：同上洗涤3—5次，每次10分钟。 5.结合二抗：用1% 的BSA稀释二抗10000倍，37度孵育1小时 6.洗涤： 同上用洗涤液洗3—5次，每次10分钟 7.显色：用Amersham的ECL显色底物，分别取1ml 2ml溶液混合，涂于膜上 * * 免疫印迹 Western Blotting Western Blotting 免疫印迹 主要内容：一、印迹的概念和分类二、印迹的流程三、免疫印迹过程四、免疫印迹技术的应用 二、印迹的流程 探针 固相载体 印迹 封阻 探针作用 显色或自显影 三、免疫印迹过程 细胞裂解液→样品在凝胶上电泳→分离好的蛋白质转移到膜上→封闭非特异性位点→与特异性抗体一起温育→与检测试剂一起温育 →显色（HRP、AP法) →化学发光(HRP、AP法) Flow Chart of Western blotting Electrophoresing the protein