王镜岩生物化学教程2008版第31章DNA的重组.pptVIP

;DNA的重组 ;(一) Holliday模型 ;(二) 细菌的基因转移与重组 ; 在细菌基因转移的不同时间将配对细胞分开，可以确定基因在染色体上的位置。F质粒DNA可以通过重组整合到受体的染色体中，使受体菌成为高频重组（Hrf)菌株，若F质粒的DNA未能完整地进入受体菌，则受体菌不能转化为F+, F质粒的DNA可以被切割出来，有时可携带宿主菌的染色体DNA，称作F?因子， F?因子携带的基因可在受体菌表达。;大肠杆菌染色体的基因图;噬菌体的基因重组;(三) 重组有关的酶 ;RecA蛋白的丝状聚合体与DNA的相互作用;RecA蛋白引起DNA同源重组的模型; 在大肠杆菌中由RuvA,RuvB和RuvC蛋白参与的同源重组。 （a） RuvA四聚体的图解。四个亚基形成的结构像四个花瓣的花。 （b） RuvA/RuvB的作用： （左）RuvA四聚体结合到Holliday位点； （中）RuvB六聚体结合到杂合双螺旋的两对面，DNA穿过其中心， RuvB六聚???的作用像马达，促进超螺旋分叉点通过复合体移动。 （右）RuvC结合到Holliday位点，由其核酸酶活性切断核酸链，切割位点由剪切体辨认。 （c） RuvA四聚体的电荷分布，蓝色表示正电荷，红色表示负电荷，注意正电荷位于四聚体的表面，有四个负电荷区域位于其中心。 （d） 假设的RuvA四聚体与Holliday位点结合的结构模型。;二、特异位点重组;;细菌的特异位点重组;免疫球蛋白基因的重组;（1）;重组位点有7和9nt的信号序列,中间间隔12或23bp。;免疫球蛋白基因重组的模型;在不同的核苷酸位点重组可以生成不同的蛋白质;三、转座重组 ; 转座子具有反向末端重复序列以及在靶部位两侧产生的同向重复序列。在该例中靶序列为5bp，转座子末端由9bp反向重复序列组成，数字1-9指序列重复碱基对。;2.组合型转座子：两个插入序列之间夹着一段序列（可以是某个基因，如抗性基因）。两个插入序列可以同向或反向排列，有时均有转座活性，有时只有一个有转座活性。;两个IS10组件构成一个复合转座子，它能使位于他们之间的任何DNA易位。当Tn10是一个小的圆形分子的一部分时，IS10重复序列可转座至环状分子的任一侧。; 插入序列使靶序列的数量增加，在插入序列两侧各有一个。;　　复制转座作用产生了转座子的一个拷贝，它插入到一个接受位点。给予位点保持不变，以致给予者和接受者都有转座子的一个拷贝。 ; 非复制转座作用在未被修复的情况下，可能造成致死突变。; 保守的转座作用不造成核苷酸的丢失，如λ噬菌体的整合和切除。; 转座子引起DNA的重排，正向重复序列的重组引起其间序列的切除或插入。; 反向重复序列的重组能引起其间序列反向排列。; 转座作用可引起给体和受体的整合或分割，并可引起转座子拷贝数的增加;(二) 真核生物的转座因子 原核生物的转座酶主要作用于产生它的转座因子，表现出顺式显性。真核生物的转座酶可以作用于任何末端具有该酶所识别的反向重复顺序的DNA,使其转移到相应的靶位点。 在玉米的激活-解离系统（activator-dissociation system, Ac-Ds)中，Ac编码转座酶(自主因子)，Ds（非自主因子）是Ac不同程度的缺失中间序列形成的，无转座酶活性，但随Ac转座后可抑制邻近基因的表达。 在玉米的抑制-促进-增变系统（suppressor-promotor-mutator,Smp)中,Smp和En（增强子）序列相似，均为自主因子，与其对应的非自主因子dSmp为有缺陷的Smp因子，转座后，若Smp插入靶基因附近的合适部位，可以促进靶位点基因的表达，若Smp插入外显子，可抑制基因的表达。;;玉米的控制元件形成转座子的不同家族，每个家族均有自主和非自主成员。;　　P品系的果蝇含有40-50个P因子（一种转座子）， P因子的mRNA前体含有3个内含子，若P品系雄性与M品系雌性交配，子一代的体细胞mRNA前体加工时保留了第3个内含子，合成阻遏蛋白，不发生转座，性细胞mRNA前体加工时切除了全部3个内含子，活跃的转座使性细胞失去功能。P雄性或M雄性与P雌性交配时，由于雌性的卵细胞质中存在抑制P因子转座酶活性的蛋白质，子代的生殖功能正常。;四、真核生物基因表达的转录前调控 1.染色体丢失:如四膜虫的大核为营养核，由小核发育而来，约10%的DNA在发育过程中被丢失。 2.基因扩增：如非洲爪蟾卵母细胞的rDNA可以大量扩增，形成1000个以上的核仁。 3.基因重排:重排可以使表达的基因发生切