“分子生物学”期末复习重点.pptVIP

Copyright ? by ARTCOM PT All rights reserved.;绪 论;DNA重组技术 将不同的DNA片段按照人们的设计定向连接起来，在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表达，产生影响受体细胞的新的遗传性状。 主要步骤包括： ①目的基因的获取（化学合成,基因组文库,cDNA文库, PCR）； ②克隆载体的选择和构建：将外源DNA连到克隆载体上，外源 DNA则可作为克隆载体的一部分在受体细胞中复制。 ③目的基因与载体的拼接； ④重组DNA分子导入受体细胞（电穿击法、热击法）； ⑤筛选含重组分子的受体细胞（抗药性标志选择等方法）。;二、重组 DNA的主要步骤 （五大步骤）;第二章 染色体与 DNA;DNA的半保留复制;①解链酶（Helicase） ②拓扑异构酶（ Topoisomerase） ③单链结合蛋白（SSB） ④引物酶（Primases） ⑤DNA聚合酶（ polymerases） ⑥DNA 连接酶（Ligases）;DNA的修复 错配修复：恢复错配。（保存母链，修正子链）。 碱基切除修复：切除突变的碱基。 核苷酸切除修复：修复被破坏的DNA（DNA链上相应位置的核苷酸发生损伤，导致双链之间无法形成氢键） DNA的直接修复;DNA的转座：所有生物体中都有一类特殊的随机DNA序列。这些序列有特殊的能力，能够作为一个不连续单位从基因组的一个位置移动到另一个位置。这种重新定位的能力叫做转座。 DNA的转座是由可移位因子介导的遗传物质重排现象。在质粒、病毒、原核生物、真核生物基因组中均有存在。可引起基因的插入突变、缺失、倒转，产生新的基因等。 转座类型： 复 制 性 转 座：整个转座子被复制后进行移位； 非复制性转座：转座子直接被移位。 转座子类型： a. 插入序列(IS) b. 复合转座子 c. TnA家族 ;第三章 生物信息的传递（上） RNA主要以单链存在; RNA既担负贮藏及转移遗传信息的功能，又能 作为核酶直接在细胞内发挥代谢功能。 不对称转录：在DNA双链分子中，转录通常只在DNA的一条链上进行，另一条链则不能转录，但可能对转录起调节作用，这种转录方式称为不对称转录。;模板识别：RNA聚合酶与启动子相互作用并相结合。 原核直接识别；真核不能，需转录调控因子按特定顺序结合于启动子上。 转录起始：RNA链上第一个核苷酸键的产生，生成由RNA聚合酶,模板和转录5端首位核苷酸组成的起始复合物。 通过启动子：转录起始后直到形成9个核苷酸短链。 转录延伸：RNA聚合酶离开启动子，沿DNA链移动并使新生RNA链沿5’-3’不断伸长。在原核生物,因为没有细胞膜的分隔,转录未完成即已开始翻译,而且在同一DNA模板上同时进行多个转录过程。 转录终止：到转录终止位点时，RNA-DNA杂合物分离，DNA恢复双链，RNA链释放。原核生物转录的终止分依赖ρ因子（强终止）与不依赖ρ因子（弱终止）。 ρ因子是NTP酶，通过催化各种核苷酸水解来促使新生RNA链从三元转录复合物中解离出来，从而终止转录。不依赖ρ因子的终止,其RNA产物3‘-端往往形成茎环结构,其后又有一串寡聚U。茎环结构可使因子聚合酶变构而不再前移,寡聚U则使RNA-DNA3’出现不稳定的rU·dA区域，利于RNA从DNA模板链脱出。;启动子：一段位于结构基因5‘端上游的DNA序列，是RNA聚合酶的结合区，其结构直接关系转录的特异性与效率。 原核:TTGACA-35 TATAAT-10起始位点 真核:增强子GC-110CAAT-70TATAA-25 5mGpp 起始位点。 ;遗传密码的特性： 连续性：即从AUG开始，各密码子连续阅读而无间断，若有碱基插入或缺失，会造成框移突变； 简并性：大部分氨基酸有多个密码子，以2～4个居多，可有6个。这种由多种密码编码一种氨基酸的现象称为简并性。决定同一种氨基酸密码子的头两个碱基是相同的,第三位碱基不同,第三位碱基发生点突变时仍可翻译出正常的氨基酸； 摆动性：mRNA密码子的前两位碱基和tRNA的反密码严格配对。而密码第三位碱基与反密码第一位碱基不严格遵守配对规则，称为密码配对的摆动性。 普遍性与特殊性：生物体的遗传密码相同，称密码的普遍性。但线粒体密码子有例外。如AUA与AUG均代表Met和起始密码子；UGA为Trp密码子而不是终止密码子等。;;tRNA的种类;?原核和真核生物核糖体的组成及功能 核糖体亚基 rRNAs 蛋白