好基因工程操作程序新课标人教版.pptVIP

1.2 基因工程的基本操作程序 (一)从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库 怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因呢? 1、根据基因的核苷酸序列 2、基因的功能 3、基因在染色体上的位置 4、基因的转录产物mRNA 5、基因的表达产物蛋白质 等 PCR（聚合酶链式反应） 体外复制DNA片段，可以在短时间内大量扩增目的的基因 2、将目的基因导入动物细胞 （1）方法：显微注射法 （2）程序： 靶序列 靶序列 引物Ⅰ 引物Ⅱ 5’ 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’ Taq DNA 聚合酶 PCR 第三步 ：延伸 利用PCR技术扩增目的基因 n 16 4 8 3 4 2 2 1 DNA数量 循环次数 30次循环后靶序列扩增的数量 2n DNA复制 PCR技术 场所 原理 条件 解旋方式 酶 特点 结果 PCR技术扩增与DNA复制的比较 碱基互补配对原则 碱基互补配对原则 四种脱氧核苷酸、模板、酶、ATP 四种脱氧核苷酸、模板、酶、引物 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化解旋 半保留复制、边解旋变复制 半保留复制、全解旋再复制 体外复制 主要在细胞核内 大量的DNA片段 形成整个DNA分子 热稳定的DNA聚合酶 细胞内的DNA聚合酶、解旋酶、DNA连接酶等 3、PCR 循环 要复制的片段 第四轮第产物：16个DNA 第二轮第产物：4个DNA 引物 第一轮第产物：2个DNA 第三轮第产物：8个DNA PCR仪 设备 实质上一台能够自动调控温度的仪器 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ③条件：_______________________、 _______________、___________ (做启动子)、 ___________.前提条件： ②原理：__________ ④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循 环的次数） ⑤结果： 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 已知基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 一对引物 DNA聚合酶 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 (二)利用PCR技术扩增目的基因 1.用一定的_________切割 质粒，使其出现一个切 口，露出____________。 2.用_____________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。 (二)基因表达载体的构建 —— 核心 3.将切下的目的基因片段插入质粒的______处， 再加入适量___________，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 的黏性末端 切口 DNA连接酶 相同 质粒 DNA分子 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） —— 核心 同一种 (二)基因表达载体的构建 4.过程: 5.基因表达载体的组成： 复制原点+目的基因+启动子+终止子+标记基因 它们有什么作用？ (三)将目的基因导入受体细胞 转化 —— 方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 1、将目的基因导入植物细胞的方法：农杆菌转化法 （1）农杆菌介绍 （2）原理及适用范围 (三)将目的基因导入受体细胞 * * 补：原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并以DNA分子的一条链为模板合成RNA。 ①不能转录为信使RNA，不能 编码蛋白质。 ：能转录相应的信使RNA，能 编码蛋白质 编码区 非编码区 原核细胞的 基因结构 ②有调控遗传信息表达的核 苷酸序列，在该序列中， 最重要的是位于编码区上 游的RNA聚合酶结合位点。 启动子 补：真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 能够编码蛋白质的序列叫做外显子 不能够编码蛋白质的序列叫做内含子 启动子 终止子 内含子： 外显子： 真核细胞的 基因结构 编码区 非编码区 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的