实用12《基因工程的基本操作程序》课件新人教选修3.pptVIP

3.条件： （1）工具：限制酶、DNA连接酶 、载体 （2）能量：ATP （3）组成：启动子、终止子、复制原点、目的基因、标记基因等 2、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定： 寻根问底：将生物的所有DNA直接导入受体细胞不是更简便吗？如果这么做，结果会怎样？ 有人采用总DNA注射法进行遗传转化，即将一个生物中的总DNA提取出来，通过注射或花粉管通道法导入受体植物，没有进行表达载体的构建，这种方法针对性差，完全靠运气，也无法确定什么基因导入了受体植物。此法目前争议颇多，严格来讲不算基因工程。 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定： 寻根问底：将生物的所有DNA直接导入受体细胞不是更简便吗？如果这么做，结果会怎样？ 有人采用总DNA注射法进行遗传转化，即将一个生物中的总DNA提取出来，通过注射或花粉管通道法导入受体植物，没有进行表达载体的构建，这种方法针对性差，完全靠运气，也无法确定什么基因导入了受体植物。此法目前争议颇多，严格来讲不算基因工程。 ④优点：经济有效。 （2）基因枪法（单子叶植物常用） 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。 主要用于单子叶植物，但是成本较高 （3）花粉管通道法 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵 新性状动物 3、将目的基因导入微生物细胞 ①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 ②方法： 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 四、目的基因的检测与鉴定 检测 ①导入检测：目的基因是否插入受体细胞 方法—— DNA分子杂交 ②表达检测 转录检测—RNA分子杂交 翻译检测—抗原抗体杂交 分子检测法 鉴定 抗虫鉴定 抗病鉴定 活性鉴定等 个体水平的鉴定 （一）、检测 1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 ①.首先取出转基因生物的基因组DNA ②.用含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作 标记,以此做探针 ③.使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带,表明目的基因已插入染色体DNA中 （1）方法: DNA分子杂交 （2）过程: 归纳步骤 DNA分子杂交示意图 采用一定的技术手段，将两种生物的DNA分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。 （二）鉴定（个体生物学水平） 2、检测目的基因是否转录出了mRNA 3、检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 ①方法: 分 子 杂 交 方法: 抗原抗体杂交 从转基因生物提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原抗体杂交，若出现杂交带，表明目的基因已形成蛋白质产品 ②过程: 用上述探针和转基因生物的mRNA杂交,若出现杂交带,表明目的基因转录出了mRNA 归纳步骤 　　大量的受体细胞接受不多的目的基因。处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少，必须将它从中检测出来。 将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。 无表达产物 无表达产物 有表达产物 无表达产物 　　 　　这个流程图是对基因工程的基本操作程序的一个高度概括。其中在第一步目的基因获取部分之前的内容意在指出获取目的基因的三种方法，即从基因文库中获取目的基因、利用PCR扩增目的基因、人工合成目的基因。但书中的图不容易让人看懂，教学中不妨对此图这部分稍作改动（如图）既可帮助学生梳理知识，而且有助于后面PCR扩增目的基因的学习。 ?? 观察分析理解课本Ｐ８基因工程基本操作流程图 ?? 联系教材内容可知，三种获取目的基因的方法实际的应用情境是这样的： 1、如果不知道目的基因的核苷酸序列，可以通过构建基因文库的办法，即通过用受体菌储存并扩增目的基因后，