分子生物学第5章原核生物的转录.pptVIP

教学要求 掌握一些基本概念: 转录的不对称性, 有义链, 反义链 , 转录单元 掌握大肠杆菌RNA聚合酶的组成及各部分的功能 理解大肠杆菌σ因子尤其是σ70的功能和识别序列 掌握原核生物转录的过程 1. 转录(Transcription) : 生物体以DNA为模板合成RNA的过程 。 2. 转录所需的物质 The precursor ribonucleotides (前体核糖核酸): NTP (ATP, UTP, GTP, CTP) Template(模板):DNA Enzyme(酶): RNA polymerase( RNA-pol) RNA聚合酶 Other protein factors 5. transcription unit（转录单元） 6.转录与复制的比较 相同点的： Template: DNA 底物: nucleotide Direction: 5′→3′ DNA-dependent polymerase 依赖DNA的聚合酶 Watson-Crick base pairing Product: polynucleotide chain 多聚核苷酸链 不同点 2. b and b ??亚基 b 由 rpoB 编码, b’ 由 rpoC 编码 . RNA聚合酶的催化中心. b subunit：含有两个结构域分别负责转录的起始和延伸。 b’ 亚基 结合两个锌离子，参与酶的催化功能。 负责酶与模板DNA相结合(充当SSB的作用)。 3. s 因子 许多原核生物含有多个 s 因子，用于识别不同的启动子 ，最常见的是s70 核心酶与s因子结合转变为全酶。 启动子识别中起着关键的作用 转录起始后，s factor 解离(RNA chain is 9-10 nt) 细胞中s 因子 比其他亚基少。 大肠杆菌RNA聚合酶的组成分析 T3 RNA聚合酶和 T7 RNA聚合酶 小分子 转录速度快 (200 nt/sec) 识别自身启动子 -55 to +20: 全酶的结合 -20 to +20: 聚合酶紧密结合 ，防止 DNaseΙ的降解 Up to position –40: 最重要 (mutagenesis analysis) -10 and –35 sequence: 6 bp, 对大肠杆菌基因的起始转录最关键 -10 sequence (Pribonow box， Pribonow框) 高度保守序列，位于 DNA解旋开始的部位。 由6个碱基组成，其中心位于-10位置处，在许多不同的大肠杆菌基因启动子中都存在。 保守序列为 TATAAT. 头两个碱基 (TA) 和最后的碱基 T 高度保守。 与转录起始位点(+1)之间的距离为 5 -8 bp。 其功能是: (1) RNA pol紧密结合; (2) 形成开放启动复合体；酶在此处与DNA结合成稳定的复合物，在转录方向上解开双链形成开放型起始结构。 (3) 使RNA pol定向转录。 -35 sequence(Sextama盒, Sextama box): RNA聚合酶的起始识别区；σ亚基识别-35序列，为转录选择模板 位于-35位置处的一个保守的六聚体序列 TTGACA 头三个碱基 (TTG) 是高度保守的 与 –10 box 之间的距离为16-19 bp RNA聚合酶的松弛（初始）结合位点 RNA聚合酶依靠其σ亚基识别该位点， 为转录选择模板——识别位点 重要性:很大程度上决定了启动子的强度 核心酶 a2bb’w, 与DNA的结合无特异的亲和性， 结合非常松散 显著的增强全酶与正确启动子结合位点相结合的特异性。 DNA解旋是必须的，使反义链通过碱基配对合成RNA。 Negative supercoiling enhances the transcription of many genes，since it facilitates(有利于) unwinding. Some promoters are not. Exceptional example: promters for the enzyme subunits of DNA gyrase(旋转酶) are inhibited by negative supercoiling, serving as an elegant feedback loop for DNA gyrase expression. 开放的启动子复合体 RNA聚合酶（全酶）移向-10区和转录起始 点,在-20区DNA双链解开12-17bp时的启动子 复合体。 1) ?亚基脱落，RNA–pol聚合酶核心酶变构，与模板结合松弛，沿3’ 5’方向前移； 2) 在核心酶作用下，NTP不断聚合，RN