生物化学简明教程 第四版 第五篇 酶.ppt

第五章 酶(enzyme) 酶的化学本质 绝大多数是蛋白质 不同分子形式的同工酶催化相同的化学反应 为什么会这样？ 酶促反应速度的测定 酶活力的测定 共价催化（covalent catalysis） 共价催化 亲电子催化 亲核催化 酶促反应的动力学 测定的反应时间越长越好吗？ 应该测定反应的初速度 研究影响酶促反应速度的因素 即底物的消耗量很小（一般在5﹪以内）时的反应速度 酶浓度与反应速度的关系 v [E] 当[S]足够大时，则v=k[E] 底物浓度与反应速度的关系 当底物浓度较低时 反应速度与底物浓度成正比；反应为一级反应。 [S] V Vmax 随着底物浓度的增高 反应速度不再成正比例加速；反应为混合级反应。 [S] V Vmax 当底物浓度高达一定程度 反应速度不再增加，达最大速度；反应为零级反应 [S] V Vmax （米氏方程） k2 k3 k2 k3 = 令： （米氏常数） k2 k3 k3 Et = E + ES k3 k3 米氏常数的意义 当 时： 因此，米氏常数的涵义是：当反应速度为最大反应速度一半时，底物的浓度 Km是酶的一个特征性常数 只与酶的性质有关，与酶的浓度无关 当酶能催化几种不同的底物时，Km值一样吗？ 如己糖激酶：以葡萄糖为底物时，km=0.15mmol/L 以果糖为底物时， km=1.5mmol/L 哪个是最适底物？ Km除了与底物类别有关外，还与哪些因素有关？ pH 温度 但与酶的浓度和底物浓度无关 所以km值是酶的一个特征性常数 如何测定米氏常数？ （1）v对[S]作图 双倒数作图法（Lineweaver-Burk作图法） 米氏方程的转换 pH对酶作用的影响 pH影响反应速度的原因 ( 1 ) pH影响了酶分子、底物分子和ES复合物的 解离状态。 ( 2 ) 过高、过低的pH导致酶蛋白变性。 因为它除了受到底物的种类、温度、时间等的影响外、还受底物浓度、酶浓度等因素的影响。 例: 碱性磷酸酶催化磷酸苯酯水解时 [s]为2.5x10-5 M，最适pH为 8.3 [s]为2.5x10-2 M，最适pH为10.0 酶的最适pH不是一个固定的常数 温度对酶反应速度的影响 它随底物的种类、浓度, 溶液的离子强度, pH, 反应时间等的影响。 最适温度与最适pH一样，也不是一个固定的常数 激活剂（activator）对酶反应速度的影响 酶的激活剂：能提高酶活力的物质 1. 无机离子 金属离子，如Na+、K+、Mg2+、Ca2+、 Cu2+、Zn2+、Fe2+等。 阴离子：如Cl-、Br-、I-、CN- 等 2. 有机小分子: 如Cys、GSH等 3. 具有蛋白质性质的大分子，如一些蛋白激活。 抑制剂(inhibitor)的影响 抑制作用（inhibition） ：使酶的必需基团的化学性质改变而降低酶活力甚至使酶完全丧失去活性的物质 1、不可逆抑制作用(irreversible inhibition) 2、可逆抑制作用(reversible inhibition) （2）非竞争性抑制作用(noncompetitive inhibition) （1）竞争性抑制作用(competitive inhibition) 1、不可逆抑制作用（irreversible inhibition） E + I → EI 例: DFP（DIFP）对胰凝乳蛋白酶的抑制 抑制剂与酶分子上的某些基团共价结合 2、可逆抑制作用(reversible inhibition) （1）竞争性抑制作用（competitive inhibition） E+I EI 单体酶 只有1条多肽链的酶。 寡聚酶 由几个亚基组成的酶，亚基之间以非共价键连接。 多酶络合物 几个酶嵌合而成的络合物，这些酶功能相关，催化一系列连续的反应 活性部位 （活性中心） 结合基团 催化基团 酶的结构与功能的关系 酶的活性中心（active center） (binding group) (catalytic group) Glu和Asp的-COOH 组成酶活性中心的氨基酸侧链基团主要有 Lys的ε-NH2 His的咪唑基 Ser的-OH Cys的-SH Tyr的侧链基团 Active sites may include distant residues. (A) Ribbon diagram of the enzyme lysozyme with several components of the active site shown in color.