第一篇2 各种光学显微镜技术.pdf

第二节 各种光学显微镜技术 2.1 明视野显微镜（bright field microscope ） 22.22暗视野显微镜暗视野显微镜 （（ddarkk fifieldld miicroscope ）） 2.3相差显微镜（Phase contrast） 22.44微分干涉显微镜微分干涉显微镜 （（DiffDifferentitiall iintterfference contrast DIC ） 22.55荧光荧光显微镜显微镜 （（FluorescenceFluorescence）） 2.6偏光显微镜（Polarizing microscope ） 22.77倒置显微镜倒置显微镜 （（InvertedInverted microscopemicroscope）） 2.8体视显微镜（Stereo microscope ） 2.1 明视野显微镜 明视野显微镜是以标本的颜色及其透射率 为基础的显微镜。 标本应经过染色处理标本应经过染色处理，才能达到应有的效才能达到应有的效 果。 在各种显微镜的观察方法中，明视野显微 镜观察是最常规的镜观察是最常规的一种种，，在生物学研究中在生物学研究中 被广泛应用。 明视野显微镜观察效果明视野显微镜观察效果 薮枝螅Obelia toothtooth enamelenamel formationformation fleaflea pine staminate cone cephalopod humanhuman epiglottisepiglottis humanhuman tonguetongue human fat human corpus luteum 2.2 暗视野显微镜 暗视野实际是暗场照明法。不直接观察到 照明的光线，而观察到的是被检物体反射 或衍射的光线或衍射的光线。。因此因此，，视场成为黑暗的背视场成为黑暗的背 景，而被检物体则呈现明亮的象。 2.2.1 暗视野显微镜特点 可以观察在普通明视场中看不见的标本。 可以观察细菌等微小标本。 观察效果如同星空观察效果如同星空。。 适用范围： 生物样品生物样品：微小水生生物微小水生生物、硅藻硅藻、小昆虫小昆虫、 骨骼、纤维、毛发、细菌、酵母、原生生物等 非生物样品：矿石、化学晶体、胶体颗粒 等 2.2.2 暗视野显微镜原理 根据光学上的丁道尔现象，微尘在强光直射通过 的情况下的情况下，人眼不能观察人眼不能观察，这是因为强光绕射造这是因为强光绕射造 成的。若把光线斜射它，由于光的反射，微粒似 乎增大了体积乎增大了体积，为人眼可见为人眼可见。 暗视野的特殊附件暗视野的特殊附件：：暗视野聚光镜暗视野聚光镜 它的特点是不让光束由下至上的通过被检物体， 而是将光线改变途径而是将光线改变途径，使其斜射向被检物体使其斜射向被检物体，使使 照明光线不直接进入物镜，利用被检物体表面反 射或衍射光形成的明亮图象射或衍射光形成的明亮图象。 暗视野观察的分辨率远高于明视野观察，最高达0.02- 0.004mm 。 humanhuman whipwormwhipworm ((TrichurisTrichuris trichiuratrichiura)). the crab megalops developmental stage LycraLycra spandexspandex fibersfibers Butterfly wing starfish Capsella embryo bryozoan 2.3 相差相差显微镜微镜 由P．Zernike于1932年发明，并因此获1953 年诺贝尔物理奖。这种显微镜最大的特点是可 以观察未经染色的标本和活细胞以观察未经染色的标本和活细胞。。 2.3.1 相差显微镜的原理 人眼只能区分光波的波长（颜色）和振幅（亮 度），对于无色通明的生物标本，当光线通过时， 波长和振幅变化不大，在明场