蛋白质的性质实验.pptVIP

实验2 蛋白质的性质实验（2） —蛋白质等电点的测定和沉淀反应 一、实验目的 1、了解蛋白质的两性解离性质。 2、学习测定蛋白质等电点的一种方法。 3、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。 4、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。 5、了解蛋白质变性与沉淀的关系。 二、 实验原理 蛋白质的两性解离性质 蛋白质等电点的概念 ?测蛋白质溶解度最低时的溶液pH值为其等电点 稳定蛋白质亲水胶体颗粒的因素 蛋白质沉淀反应的类型 蛋白质的两性电离性质 蛋白质是由AA组成的高分子化合物，具有许多游离的氨基、羧基、咪唑基、胍基、巯基、酚基等，因此与AA一样，能象酸一样解离，也能象碱一样解离，也是两性电解质。 蛋白质的两性解离性质 当溶液在某一 pH 值时，蛋白质所带正、负电荷相等，即总净电荷为零，此时溶液的 pH 称该蛋白质的等电点(isoelectric point)。 稳定蛋白质亲水胶体颗粒的因素 蛋白质的变性 蛋白质的变性 变性蛋白质通常都是固体状态物质，不溶于水和其它溶剂，也不可能恢复原有蛋白质所具有的性质。所以，蛋白质的变性通常都伴随着不可逆沉淀。引起变性的主要因素是热、紫外光、激烈的搅拌以及强酸和强碱等。 三、实验操作 具体参见实验指导书 蛋白质的盐析 重金属离子沉淀蛋白质 某些有机酸沉淀蛋白质 有机溶剂沉淀蛋白质 乙醇引起的变性与沉淀 四、 结果处理 用－、+、++、+++等符号表示各管的混浊度。根据混浊度判断酪蛋白的等电点。最混浊的一管的pH值即为酪蛋白的等电点。 五、 注意事项 缓冲液的pH值必须准确。 六、思考题 1、稳定蛋白质亲水胶体颗粒的因素有哪些？ 2、蛋白质变性与沉淀的关系。 3、解释蛋白质两性反应中颜色及沉淀变化的原因。 4、该方法测定蛋白质等电点的原理是什么？ * * 蛋白质的等电点 蛋白质的性质与它们的结构密切相关。某些物理或化学因素，能够破坏蛋白质的结构状态，引起蛋白质理化性质改变并导致其生理活性丧失。这种现象称为蛋白质的变性(denaturation)。