2-2 土壤中分离尿素的细菌的分离与计数.pptx

课题背景;3、课题目的; 1、实例：;结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。;15.0g;②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？;加入青霉素的培养基 杀死细菌等，分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基 杀死多种微生物，分离出金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基 分离出自生固氮菌（非固氮菌因缺少氮源被淘汰） 不加含碳有机物的无碳培养基 分离出自养型微生物（异养微生物因缺少有机物被淘汰） 加入抗生素的培养基 利用抗生素抗性基因作标记基因，选择分离出导入目的基因的工程菌;2.间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。 ⑵常用方法：稀释涂布平板法（稀释涂布平板计数法）。;平板菌落数统计注意事项;【例1】某同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上的菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL） A.2.34×108　　　　　　B.2.34×109 C.234　　　　　　　　　D.23.4;某班级菌落数统计表格; 第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。; 第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值;注意事项 ①设置重复组，增强实验的说服力与准确性。 ②为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。 ③当菌落数目稳定时，才能进行计数，否则，会因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 ④统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。（因此统计结果一般用菌落数而不用活菌数来表示）;（三）设计对照; 一种方案是可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验，如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有??题。;从肥沃、酸碱度接近中性的湿润土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。;;（三）、样品的梯度稀释;（四）、取样涂布（稀释涂布培养法）;㈤、微生物的培养与观察，并记录结果;[一]无菌操作 1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。 2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。 3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。 [二]做好标记 本实验使用的平板和试管较多。为了避免混淆，最好在使用前就做好标记。例如，注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。 [三]规划时间;四、结果分析与评价;CO（NH2）2+H2O CO2+2NH3;——滤膜法;五、课题延伸