动物细胞工程制药1.pptVIP

第一节 概述 第二节 动物细胞的形态和生理特性 第三节 生产用动物细胞的要求和获得 第四节 动物细胞的培养条件和培养基 第五节 动物细胞培养的基本方法 第六节 动物细胞大量培养的方法和操作方式 第七节 动物细胞生物反应器 第八节 动物细胞产品的纯化方法和质量要求 第九节 动物细胞制药的前景与展望 第一节 概 述 Robert Hooke 及其制作的显微镜 Leeuwenhoek首次观察到了活的细胞 德国植物学家Schleiden和动物学家Schwann创立了细胞学说。 1885年Roux用生理盐水成功培养鸡胚组织。 1907年Harrison成功培养了离体的蛙胚神经组织，并观察到神经细胞突起的生长过程。开创现代细胞培养的新纪元。 细胞工程是以细胞为单位，按人们的意志，应用细胞生物学、分子生物学等理论和技术，有目的地进行精心设计，精心操作，使细胞的某些遗传特性发生改变，从而达到改良或产生新品种的目的，以及使细胞增加或重新获得产生某种特定产物的能力，从而在离体条件下进行大量培养、增殖，并提取出对人类有用的产品。 一、动物细胞的形态 贴壁细胞 这类细胞的生长必须有可以贴附的支持物表面，细胞依靠自身分泌的或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长和繁殖。当细胞在该表面生长后，一般形成两种形态，即成纤维样细胞型或上皮样细胞型。 悬浮细胞 这类细胞生长不依赖支持物表面，可在培养液中成悬浮生长，通常呈圆形，如血液内的淋巴细胞。 兼性贴壁细胞 这类细胞并不严格地依赖支持物，如CHO细胞。 二、动物细胞的化学组成和代谢 动物细胞的化学组成 无机成分：水、无机盐 有机成分：蛋白质、糖类、脂类、核酸 动物细胞的代谢 糖、脂肪和蛋白质的代谢分为三个降解阶段 （1）大分子降解为小分子 （2）小分子代谢产生三个主要的中间产物 （3）中间产物进入三羧酸循环 三、动物细胞的生理特点 1、细胞的分裂周期长：一般12~48 h 2、细胞生长需贴附于基质，并有接触抑制现象 接触抑制现象：指细胞在生长过程中达到相互接触时停 止分裂的现象。 3、正常二倍体细胞的生长寿命是有限的：时间长短决定 于细胞来源的种族和年龄 原代培养 有限细胞系 无限细胞系（连续细胞系） 4、动物细胞对周围环境十分敏感 对理化因素敏感：如渗透压、pH、离子强度、剪切 力、微量元素等。 5、动物细胞对培养基的要求高 必需氨基酸、维生素、无机盐、微量元素、葡萄糖、 细胞生长因子、贴壁因子等。 6、动物细胞对蛋白质的合成途径和修饰功能与细菌不同 动物细胞生产药物 缺点：培养条件高、成本贵、产量低 优点：分泌胞外、收集纯化方便，较完善的翻译后修饰，与天然产品一致 第三节 生产用动物细胞的要求和获得 一、生产用动物细胞的要求 二、生产用动物细胞的获得 三、基因工程细胞的构建和筛选 四、常用生产用动物细胞的特性 五、细胞库的建立 一、生产用动物细胞的要求 1、只有从正常组织中分离的原代细胞才能用来生产生物制品，如鸡胚细胞、兔肾细胞等 2、二倍体细胞，即使经过多次传代也可用于生产，如WI-38，2BS细胞等 3、用异倍体传代细胞生产重组基因产品，如t-PA、EPO、Ⅷ因子等 4、按照FDA对细胞株的要求，控制最终产品中DNA残留量 二、生产用动物细胞的获得 1、原代细胞 直接取自动物组织、器官，经过粉碎、消化而获得的细胞悬液。如鸡胚细胞、原代兔肾细胞或鼠肾细胞、淋巴细胞等。 用原代细胞生产生物制品常需要大量的动物，费钱费力。 2、二倍体细胞系 原代细胞经过传代、筛选、克隆，从多种细胞成分的组织中挑选并纯化出某种具有一定特征的细胞株 由于该类细胞寿命有限，一般从动物的胚胎组织中获取。如WI-38、MRC-5、2BS等 3、转化细胞系 失去了正常细胞的特点，获得了无限增殖的能力。 转化细胞系具有无限生命力，常常倍增时间较短，对培养条件和生长因子等要求较低，更适于大规模工业化生产。如Namalwa、CHO、BHK-21、Vero细胞等。 4、融合细胞系 细胞融合：指两个或两个以上的细胞合并成一个细胞的过程 目前常用的融合方法有：仙台病毒融合法、聚乙二醇融合法、电融合法 （1）仙台病毒融合法（很少使用） 融合过程： 病毒加入两种细胞（4℃），附膜，细胞凝聚 37℃，病毒与细胞膜反应，细胞膜被破坏 两细胞连接部穿通，周边连接部修复 细胞融合 （2）聚乙二醇（PEG）融合法 常用相对分子量为1000，浓度为50%，pH在8.0~8.2时融