2009化学发光临床应用-1.pptVIP

化学发光分析技术及临床应用 陕西省人民医院 张新利 标记免疫学发展 放射免疫 （灵敏度 10-16mol/L ） 酶联免疫 （灵敏度10-15 mol/L ） 化学发光 （灵敏度10-17--19mol/L ） 时间分辨荧光（灵敏度10-18mol/L ） 生物芯片 放射性免疫分析法（RIA） 应用 放免自60年代问世以来对临床诊断起了革命性的贡献，是一项较为成熟的诊断技术。 夹心法、竞争法的标记原理为以后的检测技术的发展奠定了基础。 缺点 放射性（125 I），对环境的污染 125 I 的半衰期短而导致其试剂有效期短。 标准曲线有效期短，必须每次定标，造成浪费。 酶免疫分析法（ELISA ） 应用 酶免的最大优势在于避免了对环境和人体危害。 试剂有效期较长。 常用酶辣根过氧化物酶(HPR) 底物四甲基联苯胺(TMB) 缺点 灵敏度、重复性不及放免，易造成漏检和假阳性。 因酶的纯度和反应过程容易受环境因素影响，导致稳定性不好。 化学发光免疫分析法 （chemiluminescent immunoassay） 以丫啶酯直接标记—拜尔ACS180系统 以HRP标记，鲁米诺为发光底物 以AP(碱性磷酸酶 )为标记物，AMPPD为发光底物 化学发光免疫分析将成为主流技术. 1.非放射性 2.高灵敏度 3.宽线性范围 4.试剂有效期长 化学发光分类 按化学反应类型分类 1.酶促化学反应: HRP---鲁米诺和AP(硷性磷酸酶)--- AMPPD(螺旋金刚烷环氧化物)系统 特点:发光过程标记物酶基本不被消耗,发光剂过量.因此发光信号强而稳定,发光时间长，可采用速率法测量，所以检测方式简单、成本较低。 缺点：工作曲线可能随时间漂移，低端斜率容易呈非线性下移。 2.非酶促化学反应：丫啶酯---过氧化氢系统 特点：标记物被消耗，发光信号持续时间短，只能进行一次性测量。多采用积分法测量。 仪器成本和维护费用高。 闪光和辉光的持续时间与测量方式 时间分辨荧光技术原理 （TRF） 用三价稀土离子及其螯合物作为示踪物 当免疫反应发生后，根据稀土离子螯合物的荧光光谱的特点 （特异性强、荧光光谱的Stokes位移、寿命长），用时间分辨荧光分析仪，测定免疫反应最后产物的荧光强度。 根据荧光强度和相对荧光强度比值，判断反应体系中分析物的浓度，达到定量分析的目的。 生物芯片 定义：用来检测生物反应及讯号的芯片统称为生物芯片 分类： 蛋白芯片检测流程图 关于检测方法灵敏度、正常值 目前化学发光、时间分辨等技术已接近免疫检测技术的理论极限。（每次实验加样50微升，按摩尔常数计算，此时样品 只有几十个待测分子） 提高检测灵敏度的瓶颈在于抗体亲和力和干扰免疫反应的因素，而不是检测技术本身。 检测方法不同，正常值不同。 实验室检验与临床关系 1. 实验室实事求是的提供准确结果 2. 检验结果只做普遍意义的解释,不能对某一具体 病例作出最终诊断. 3.由于个体差异、不明原因干扰因素的存在，总有个别病例结果与临床不符。 4. 正常参考值定义为95%或99%健康人的数值范围,健康人有一定几率在正常范围之外. 5.标本按要求采集和贮存。 6. 检验结果受病人服药和其他基础疾病的干扰。  常用的检测项目 一、甲状腺系列 总三碘甲状腺原氨酸(TT3) 总甲状腺素（ＴＴ4） 3，3‘，5‘--三碘甲状腺原氨酸（rT３） 促甲状腺素(TSH) 游离三碘甲状腺原氨酸（ＦＴ3) 游离甲状腺素（ＦＴ4) 甲状腺球蛋白抗体（ＴGＡ） 甲状腺微粒体抗体（ＴＭＡ）  二、生殖激素系列 １、黄体生成素（ＬＨ） ２、卵泡刺激素（ＦＳＨ） ３、垂体泌乳素（ＰＲＬ） ４、雌二醇（Ｅ２） ５、睾酮（Ｔ） ６、孕酮（Ｐ） ７、人绒毛膜促性腺激素β—亚单位（β—ＨＣＧ） 三、肾功系列 １、β-２微球蛋（β２—mG） ２、白蛋白（ＡＬＢ） ３、免疫球蛋白Ｇ（ＩgＧ） ４、α１—微球蛋白（α１—mG）  四、糖尿病系列 胰岛素释放试验（Ｉns） Ｃ肽（Ｃ—Ｐ） 五、肝炎 1、乙肝病毒表面抗原（ＨＢsＡ） 2、乙肝病毒表面抗体（抗—ＨＢs） 3、乙肝病毒e抗原（ＨＢeＡg） 4、乙肝病毒e抗体（抗—ＨＢe） 5、乙肝病毒核心抗体（抗—ＨＢＣ） 六、肝纤维化系列 １、ＩＶ型胶原 ２、层粘连蛋白（ＬＮ） ３、透明质酸（ＨＡ) 4、 Ⅲ型前胶原肽（ PⅢP） 七、肿瘤标志物 １、甲胎蛋白（ＡＦＰ） ２、癌胚抗原（ＣＥＡ） ３、糖抗原５０（ＣＡ—５０） ４、糖抗原１９—９（ＣＡ１９