神经胞吐蛋白相关研究.docx

神经胞吐蛋白相关研究1． SNAREs蛋白形成SNARE超家族1.1 SNAREs蛋白的分类SNAREs的命名源于它们最初是作为 N-乙基马来酰胺-敏感因子（N-ethyl-maleimide-sensitive factor,NSF）和可溶性NSF附着蛋白（soluble NSF attachment proteins,SNAP）的膜受体，即SNAPs蛋白受体（SNAP receptors,SNARE）。SNAREs在酵母细胞和神经细胞被独立发现，根据其分布和功能SNAREs被区分为 t-SNAREs(target membrane SNAREs)和v-SNAREs（vesicle membrane SNAREs）。t-SNAREs包括syntaxin和SNAP-25家族，v-SNAREs包括VAMP / synaptobrevin及其相关蛋白。所有的SNAREs都有一个大约60个氨基酸的共同结构域，被认为是SNAREs模体。模体决定了所有SNAREs的特征并且介导SNAREs核心复合体（core complexes）的形成，在功能上非常重要。除了SNAREs模体，SNAREs还具有旁侧序列使SNAREs与细胞膜连接，介导蛋白与蛋白的相互作用［1］。1.2 SNAREs蛋白的基因组分析Littleton JT［2］发现酵母基因组沿其分泌途径有8个t-SNAREs 的syntaxin成员，其中Sso1p/Sso2p分布在浆膜上，Ufe1p在内质网上，Pep12p在核内体／溶酶体上，Vam3p在液泡上，Sed5p在中间室和顺式－高尔基体上，Tlg1p/Tlg2p在反式-高尔基体和早期核内体上。果蝇基因组有11个syntaxin家族成员，线虫基因组编码9个syntaxin。t-SNAREs超家族还包括SNAP-25／Sec9p，但不像syntaxin家族那么庞大，仅有三种果蝇和线虫基因产物编码SNAP-25相关蛋白。其中包括两个SNAP-25同源物和一个SNAP-29的同源物。SNAP-29亚家族如酵母Sec9p,缺乏能使其停靠在浆膜上的棕榈酰半胱氨酸残基，SNAP-29可能作为胞质蛋白与syntaxin发生作用。v-SNAREs家族在酵母中有10个成员，而在果蝇中只分离出了5种，包括3个synaptobrevin,1个Ykt6p和1个Sec22p的同源物。总之，从酵母到果蝇v-/t-SNARE数目上的变化很少，显示从单细胞生物到多细胞的真核生物亚细胞结构的分化是保守的。2． SNAREs核心复合体的形成及膜融合机制2.1 SNAREs核心复合体（CORE COMPLEX）螺旋（一个来源于syntaxin,一个来源于synaptobrevin，两个来源于SNAP-25）形成四螺旋结构［1］［3］。Synaptobrevin/VAMP,syntaxin及SNAP-25以1：1：1的比例聚合成稳定的三聚体结构,即SNAREs核心复合体。在实验条件下这种聚合是不可逆的。复合体遇热或变性剂均不变性，可以抵御肉毒杆菌和破伤风神经毒素的蛋白水解作用。Synaptobrevin，syntaxin 和SNAP-25通过SNAREs模体彼此专有性地结合。一个核心复合体通过四个孤立的SNAREs模体2.2 膜融合机制在膜融合开始阶段，首先是囊泡膜停靠在胞质膜，Rab蛋白、Rab效应蛋白、v-SNAREs与胞质膜上t-SNAREs形成特异性的复合体（松散型复合体）。随后SNAREs核心复合体装配，迫使两层膜靠近、弯曲（curvature）,近端结合。此时的SNAREs是反式-SNAREs（因VAMP与syntaxin在相对着的两个膜上）。在形成融合孔前会形成不稳定的半融合孔，没有VAMP的存在SNAREs很难形成也无法稳定半融合孔状态。当Ca2+与synaptotagmin结合，促进VAMP和syntaxin的跨膜结构域重排形成顺式-SNAREs，膜远端结合进而形成融合孔，融合孔扩张，使递质释放。此时，胞质中的α-SNAP和NSF募集至此，与SNAREs核心复合体结合，NSF发挥ATP水解酶的作用，使SNAREs复合体解聚，结果SNAP-25、VAMP和syntaxin又呈游离状态，经再循环到达合适位置并加入下一个突触囊泡胞吐过程。虽然SNARE核心复合体的形成本身可能并非膜融合所必不可少的，但作为一个催化过程，它可以稳定中间状态（半融合中间物）或者是催化融合孔的形成［4］［5］。在SNAREs核心复合体形成以前，Sec1/munc18与syntaxin结合，使其空间构型呈闭合状态，一旦膜融合开始，rab蛋白促进Sec1/munc18与syntaxin的解离，使syntaxin闭合的空间构型打开，启动SNAREs复合体的装配。Vogel K［6］等认为