雄激素对小鼠前列腺细胞增殖凋亡及相关增殖因子的影响.doc

雄激素对小鼠前列腺细胞增殖凋亡及相关增殖因子的影响 　　作者：贾彬 黎玮 剧亚崇 蔡文清 作者单位：河北医科大学法医学系，河北 石家庄 050017 　　【摘要】 目的 探讨外源性雄激素对小鼠前列腺细胞增殖凋亡及部分相关生长因子表达的影响，了解雄激素在前列腺生长发育中的作用。方法 对20例睾酮处理的，以及20例空白对照昆明种雄鼠前列腺标本，采用流式细胞术检测细胞增殖指数、凋亡率及表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达水平。结果 经雄激素处理后，小鼠前列腺细胞增殖指数明显升高(P0.01)，凋亡率明显降低(P0.01)，EGF标记率和表达水平显著升高(P0.01)，bFGF标记率和表达水平也明显升高(P0.05)。结论 雄激素可促进前列腺细胞增殖、凋亡的严重失衡以及促增生生长因子的高表达是导致小鼠前列腺增生的重要原因。 　　【关键词】 前列腺增生;雄激素;增殖与凋亡：生长因子 　　关于雄激素在前列腺增生中作用已得到共识，认为前列腺的正常发育有赖于雄性激素，改变雌雄激素的比例可诱发前列腺的增生，在培养的前列腺细胞中加入雄激素可使生长因子的表达增加，使用抗雄激素类药物可治疗前列腺增生并与抗凋亡基因表达有关〔1～3〕。但雄激素是如何使前列腺发生增生，机制尚不完全清楚。本研究从前列腺细胞增殖、凋亡和生长因子的表达等方面探讨了雄激素对前列腺增生的作用机制，为临床治疗良性前列腺增生(BPH)提供依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物及分组 　　由河北医科大学实验动物中心饲养的雄性昆明小鼠40只(合格证号：医动字第04056)，鼠龄为出生后22～27(平均24.2) d，体重15～20(平均16.4) g。 随机分为实验组和对照组，每组20只。 　　1.2 给药方法 　　实验组小鼠：皮下注射麻油稀释后的睾酮0.02 mg·只-1·d-1，连续给药至第28天断颈处死，剖腹取前列腺称重后70%乙醇固定，4℃冰箱冷藏备用;对照组小鼠：皮下注射等量麻油其余处理与实验组相同。 　　1.3 FCM单细胞样品制备 　　采用搓网法。将70%酒精固定的标本用生理盐水冲洗后，将组织剪碎，放在搓网上用眼科镊子轻轻搓组织，边搓边用盐水冲洗，直至将组织搓完，收集细胞悬液，500～800 r/min离心2 min，用生理盐水离心洗涤2次，置0～4℃冰箱待测。 　　1.4 增殖和凋亡的FCM荧光检测样品制备 　　采用碘化丙啶一步DNA荧光染色法〔4〕。 　　1.5 EGF、bFGF的FCM免疫荧光检测样品制备 　　采用间接免疫荧光标记法，取1×106/ml细胞，用PBS液洗涤2次，每次1 000 r/min离心2 min，去上清液，加入1∶100的鼠抗人单抗(EGF)或1∶50兔抗人多抗(bFGF)，在37℃水浴中温育30 min，用PBS洗涤2次，离心弃上清，加入1∶100稀释的羊抗鼠(或羊抗兔)FITCIgG 100 Μl，37℃温育30 min，洗涤2次，离心弃上清，除去未结合的多余荧光抗体，上机检测前加入1.0 ml PBS液，经400目筛网过滤，即上机分析。同时设有：①PBS代替一抗的阴性对照;②只加一抗的阳性对照;③只加1∶100FITCIgG(二抗)的阳性对照;④小鼠血清或兔血清的同型对照。 　　1.6 免疫荧光及碘化丙啶荧光的FCM检测 　　应用FACS420型流式细胞仪进行。测定前以鸡红细胞作为标准样品调整仪器的CV值在5%以内。数据采集均采用线性方式。数据和图像送入HP300 Cpmsprt 30计算机，应用相应的程序软件进行资料处理，计算标记率(%表示)和表达水平(以荧光指数FI值表示相对含量)，以增殖指数表示细胞增殖情况，以DNA亚二倍体峰计算凋亡率。 　　1.7 统计学处理 　　所有数据均以x±s表示，采用state软件两个样本的t检验。 　　2 结 果 　　2.1 前列腺湿重的变化 　　实验组小鼠前列腺湿重(45.67±2.79)mg，对照组小鼠前列腺湿重(20.40±4.96)mg，实验组前列腺湿重显著高于对照组(P0.01)。表1 雄激素对前列腺细胞增殖、凋亡、EGF和bFGF因子表达的影响(略) 　　2.2 前列腺细胞增殖、凋亡，EGF、bFGF表达水平的变化 　　如表1所示，经雄激素处理后，实验组小鼠前列腺细胞增殖指数明显高于对照组(P0.01)。凋亡率明显降低对照组(P0.01)。EGF、bFGF的表达，EGF的表达实验组标记率和表达水平显著高于对照组(P0.01)。bFGF的表达，实验组标记率和表达水平明显升高(