酶学-5-抗体酶与酶的修饰及活性调节.pptVIP

抗 体 酶 （ abzyme ） （ catalytic antibody ） 知 识 要 点 1、什么是抗体酶？ 2、抗体和酶的特点比较 3、抗体酶的作用特点 4、抗体酶的制备 5、抗体酶的应用前景 什么是抗体酶？ ●在免疫球蛋白的易变区赋予酶的属性，成为具有催化活性的抗体 ●生物学与化学的研究成果在分子水平上交叉的产物 ●抗体的多样性+酶分子的高效催化=新酶设计 ●酶反应过渡态类似物作为半抗原免疫动物产生有催化活性的抗体，采用单克隆抗体技术获得这种具有酶特性的抗体。 基　本　概　念 ①　　免疫？ ②　　抗体？ ③　　抗原？ ④　　半抗原？ ⑤　　多克隆抗体？ ⑥　　单克隆抗体？ 免疫系统和免疫球蛋白功能 人免疫球蛋白的分类 免疫球蛋白IgG的一级结构 IgG结构 IgM的一级结构 IgG的空间结构 IgG与抗原形成 的交联晶格 多克隆抗体和单克隆抗体 抗体和酶的特点比较 酶 抗体 底物结合专一性 比较高 非常高 底物结合形变 容易变形 不易变形 种类 比较多 非常多 物质转变活性 高 无 如何将抗体转变成酶？ 抗体酶研究背景 ●1948年Linus Pauling提出了酶的过渡态催化理论,认为酶和底物结合不是在基态上，因为酶与基态底物的结合十分困难，需要克服很大的能障。过渡态结构十分容易与酶结合，因为酶结构经过底物诱导等，亲和力最强。十分容易越过能障，加速催化速度。 　所以酶具有催化速度快和高选择性（专一性） ●1986年，美国的Schultz小组研究“对硝基苯酚磷酸胆碱　 　脂（pNPPC）”相应的羧酸二酯水解反应的过渡态类似物　 　时，推测用这个过渡态类似物作半抗原 这样的分析，后来的确从中 　选出了两株有催化活性的单 　克隆抗体,一株MOPC167的 　　水解速度达到了1.2x104 倍。 经过测定，这个抗体 　酶符合米氏方程，具有 　　　　　　　　　底物专一性需要一定的温 度等酶的催化特征。 抗体酶的作用特点： ●在专一性方面超过或相当于我们讲的普通酶。 ●在反应速度方面接近普通酶，目前在总体上要　　 　低一些。 ▲原因： 　抗体酶没有结构诱导等动态变化； 　产物释放困难； 　底物、产物的交换困难。 抗体酶的制备 一、酶蛋白诱导法 二、半抗原诱导法 三、抗体分子修饰法（引入法） 诱导法制备具有酯酶活性的抗体 半抗原诱导法（细胞融合法） ●先用特定的半抗原(过渡态底物决定)与载体蛋白相连(如牛血清白蛋白等)。此 偶联的物质作为抗原 ? 免疫动物，产生抗体?? 产生抗体的脾脏细胞与骨髓融合，然后在体外培养，杂交体克隆化，然后繁殖成单一细胞或菌落单一细胞或菌落产生抗体。? 用标准单克隆抗体技术来制备、分离、筛选抗体酶 关键：用什么样的抗原才能诱导出具有特定的酶催化功能的抗体？即由抗体向酶 的转变过程。 引入法(辅助因子）： ●是用选择性的化学修饰、基因工程或者蛋白质工程方法，将催化基团和辅助因子引入抗体的抗原结合部位。 ●Schultz等人在IgAMOP315抗体结合部位选择性引入巯基，然后用亲和色谱纯化。结果：它水解香豆酯的速度比对照高6×104倍 ●酶的活性中心很多有金属离子。Lerner等将金属离子引入抗体酶，成功地催化了肽键的选择性水解。他们用三乙撑胺Co3+盐作为金属离子辅因子，半抗原分子带有一肽键,通过羧酸根及仲胺基与金属离子相连,再共价连接在载体蛋白上，免疫动物后产生的抗体，在金属离子复合物作为辅因子的参与下，这些抗体酶能选择性水解甘氨酸和丙氨酸之间的肽键，其转化数达6×104。 ●吸毒是一个困绕着很多国家的难题，尤其是吸毒上瘾后很难戒掉。目前，直接拮抗可卡因上瘾的抗体还没有找到。 ●替换的方法是阻断可卡因、鸦片和受体的结合。虽说抗鸦片的抗体能有效拮抗注射海洛因上瘾