项目5抗体生产技术任务1杂交瘤细胞生.pptVIP

教学安排： 1. 员工培训 由老师讲解抗体生产的理论基础及应用范围。 分配实操任务：杂交瘤细胞培养生产抗体。 2. 学生模拟组建运营一个单抗生产企业，撰写计划书(在理论教学期间完成)。 市场部：抗体的结构、功能、用途，抗体市场状况与销售预测，竞争对手状况与分析。 技术部：确定抗体生产的工艺流程及工艺参数，编制生产操作规程，确定生产车间的布局。 品控部：制定抗体的质量标准，生产取样分析操作规程，质量检测标准和操作规程。 总经理：协调监督各部工作，最后拿出完整的计划书。 3. 计划书实施。 计划书要先经过老师的审核，然后实施。 实施过程中考核操作技能。 实施后及时进行实训报告的撰写也总结。 抗体：是由抗原刺激机体后，由淋巴B细胞经分化增殖的浆细胞合成、分泌的，能与相应抗原特异结合并具有多方面免疫功能的球蛋白。 　　第一节　抗体分子的结构与功能 一　抗体分子的结构 　 　 　 轻链　约210aa； 重链　约450aa。 可变区　V区，不同抗体不同； 恒定区　C区，所有抗体相同。 互补决定区　CDR区。 铰链区　　重链中间含脯氨酸段。 木瓜蛋白酶处理　两个Fab片断和一个Fc片断。 　 Fc片断功能： （1）激活补偿功能系统； （2）产生细胞依赖性毒素； （3）Fab区域结合一个可溶性抗原后，抗体Fc结合巨噬细胞Fc受体。 二　抗体分子的功能 （1）IgG　主要免疫球蛋白，具有免疫凝集与免疫沉淀、免疫调理、抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用、激活补体系统、固定细菌和病毒等作用。 （2）IgA 分布在鼻、咽、支气管、胃肠道、生殖器官等黏膜及分泌液中，有杀菌、抗病毒作用。 　 （3）IgM 分布于血液中，具有补体激活功能，防止发生菌血症、败血症。 （4）IgE　其Fc片段与肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面Fc受体有亲和性，因此能激活这些细胞。 （5）IgD　防止免疫耐受方面有一定作用。 　第二节　单克隆抗体 多克隆抗体： 　　由同一抗原产生的不同的抗体统称为多克隆抗体。 单克隆抗体： 　　由单个淋巴细胞针对某一抗原决定簇产生的单个抗体称为单克隆抗体。 　 单克隆抗体 的生产过程： 一、 杂交瘤技术的基本原理 三、 基因工程抗体制备 将两种分泌不同特异性单抗的杂交瘤细胞进行再次融合，产生四源杂交瘤 (quadroma)。但二次杂交瘤细胞株分泌的是两套重链，轻链的随机组合物。BsAb在其中的比例可为10%～50%不等。多倍杂交瘤细胞的稳定性差，BsAb的产量少且活性低，费时费力，临床应用时存在人抗鼠抗体免疫反应 (HAMA)，因此不适用于临床。 四、 单克隆抗体的应用 嵌合抗体 定义：指利用基因工程技术，将人抗体可变区（V）中互补决定簇（CDR）序列改换成鼠源单抗CDR序列。重构成既具有鼠源性单抗的特异性又保持抗体亲和力的人源化抗体。RAb亦叫“重构型抗体”，因其主要涉及CDR的“移植”，又可称为“CDR移植抗体 意义：多种特异的鼠源单抗有可能应用于临床治疗 2、改型抗体 Fab：抗原结合片断 Fv：可变区片段 ScFv：单链可变区片段 SdAb：单区抗体 (二)、小分子抗体 小分子抗体 其它生物活性蛋白融合 (三)、抗体融合蛋白 　 许多抗原抗体反应要求双价的抗原结合位点，使抗原分子上的两个表位交联或使两个抗原分子连接。将识别肿瘤抗原的抗体和识别细胞毒性免疫效应细胞表面分子的抗体连结在一起，可使效应细胞更容易与肿瘤细胞结合识别，取得杀伤肿瘤细胞的作用。 (四)、双特异性抗体 分别分离纯化两种不同的McAb，使各抗体解离为单价抗体，再使两种不同抗原特异性的单价抗体通过化学试剂交联起来，然后分离出目的组分。此法缺点是容易导致抗体失去活性，产物均一性不佳。 化学交联BsAb 细胞工程BsAb 多采用抗体分子片段,如Fab，Fv或ScFv,经基因操作修饰后,或体外组装为BsAb,或直接表达分泌型的BsAb。 基因工程BsAb 定义：将体外克隆的抗体基因片段插入噬菌体载体，转染工程细菌进行表达，然后用抗原筛选即可获得特异的单克隆噬菌体抗体。利用这一技术可以得到完全人源性的抗体，在HIV等病毒感染和肿瘤的诊断与治疗方面有其独特的优越性 (五)、噬菌体抗体库技术 用PCR扩增人抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因 克隆到噬菌体载体并以融合蛋白的形式表达在其外壳表面 用抗原抗体反应筛选出表达所需要抗体的克隆并扩增。 使抗体基因以分泌的方式表达，获得可溶性的抗体片段。 抗体库： 组