抗玉米小斑病突变体.PDF

遗 传 学 报， 14(5):355-362,.1987 4cta Cenetica Sinica 诱发玉米抗小斑病突变体的研究 W．从玉米单倍体胚性细胞无性系筛选 抗玉米小斑病突变体 郭丽娟 胡启德 康绍兰 张浩 黄梧芳 （中国科学院遗传研究所，北京） 河（北农业大学，保定） 将经，射线和 EMS诱变处理的玉米八kA白单倍体呸性细胞无性系为试验材料，以玉米 小斑病菌 Heimintho.cporiummaydi‘单咆系342号菌株产生的致病毒素为选择剂，采用正选 择法进行筛选，已获得抗玉米小斑病的突变体。这个突变体脱离选择剂5代 5（个月）后性状 稳定，用小斑病Ma的分生抱子直接接种鉴定仍具有很强的抗病力。过氧化物酶同工酶的分 析，抗病突变体与不抗病对照间出现明显差异。 关键词：单倍体胚性细胞无性系；抗病突变体；玉米小斑病菌 玉米小斑病是国内外玉米产区发生普遍而危害严重的病害，我国在防治小斑病中应 用抗病品种曾取得一定成就，但由于用常规育种途径获得抗病品种的周期长，远不能满 足生产七的需要，而从其它途径特别是周期短的途径解决玉米抗病品种的研究工作还不 多。 近十多年来，利用植物组织和细胞培养技术，诱发和筛选抗病突变体的研究进展很 快，在有些作物上已获得了具有很大经济价值的抗病突变体，为作物改良开辟了一条新的 途径。 国外自七十年代初 Carlson首先成功地获得了抗烟草野火病突变体[2,3，以来，一些科 学工作者又相继从甘蔗183马铃薯C13、油菜93〔和玉米5-〔73等作物上获得成功。Earle还研究 了毒素对玉米原生质体的作用41〔0 在国内，中国科学院遗传研究所与河北农业大学合作，于1981年开展了诱发抗玉米 小斑病突变体的研究。 利用具有增殖和分化能力的玉米单倍体胚性细胞无性系为材料， 通过理化诱变处理，用正选择法，并以玉米小斑病菌产生的致病毒素为选择剂，在短期 内已诱发和筛选出抗玉米小斑病的突变体，并建立了一套简便可行的筛选和鉴定体系。这 一研究有助于在理论上进一步研究作物的抗病机制与遗传规律，在应用上可以加速抗病 raK：种的培育和推广。 材 料 和 方 法 一（）试验材料和培养基 以增殖速度快和有分化植株能力的八趟白玉米单倍体 本文于 1986年3月3日收到． 356 遗 传 学 报 14卷 胚性细胞无性系为试验材料。应用三种培养基：第一种继代培养基以MS培养基为基本 培养基；第二种选择培养基是将玉米小斑病菌的培养滤液按0.1多,0.5外,5多,15外、25% 及50并不同浓度分别加人MS培养基内；第三种分化培养基以风培养基为基本培养基。 二（）理化诱变处理 取在MS继代培养基上生长旺盛的单倍体无性系胚性细胞 团，分别转到含化学诱变剂 EMS0.125外,0.25务,0.5外,1外 和2外5种不同浓度的4多 蔗搪一磷酸缓冲液中处理2.5小时，每种浓度处理4瓶。 处理后再转移到选择培养基上 进行培育。将另一批胚性细胞团放置在剂量率为60伦／分钻源下进行500,1000,3000, 5000,7000伦的r射线照射，每种剂量照射6瓶，均以未经处理和照射的胚性细胞团为对 照。 三（）小斑病菌培养滤液的制备 首先从大量菌株中用生物测定法选出产生致病 毒素作用强而稳定的小斑病菌单抱系342号的菌株，然后将这种菌株的第一代菌体放在 改良的 Fries液体培养基内振荡培养，21天后将培养物过滤，取过滤液经消毒和浓缩后 备用。 （四）抗病性鉴定 供测的胚性细胞团用小斑病菌的分生抱子进行定量接种，每个 细胞团接种1--2个分生抱子，接种后置25-28℃温箱中培养，72小时后按四级标准调 查抗病程度。 五（）同工酶的测定 分别取筛选出的抗病胚性细胞团及其再生植株的叶片，以未 经处理的胚性细胞团及其再生植株的叶片为对照，每样品鲜重为200毫克加 Tris一柠檬 酸缓冲液2毫升 p（H8.2)，在低温下碾磨、过