荧光定量PCR技术在疟疾诊断中的应用.pdfVIP

Prev 127 实用预防医学2叭4年1月第21卷第1期PractMed，Jall．2014，V01．21，No．1 ·综述· 荧光定量PCR技术在疟疾诊断中的应用 万向阳1，孙菲1，李欢2 1．湖南国际旅行卫生保健中心，湖南长沙410007；2．中南大学湘雅医学院医学检验系 摘要：疟疾是一种严重危害人类健康和生命的疾病，我国输入性疟疾呈上升趋势，近年来国内外应用荧光定量P(、R技 术进行疟疾的快速检测和分型，在低密度疟原虫感染水平的检测更为敏感。荧光探针法是利用探针与靶序列特异杂交来 指示扩增产物的增加，特异性高，但试剂价格昂贵，而且对样本处理有特殊要求。荧光染料法是利用它结合到双链DNA 发射荧光信号指示扩增产物的增加，简便易行，相对便宜，但是不能用于多重检测。随着荧光定量P(、R技术的不断发展， 在标本处理、标记技术等领域有了新的进展，并在疟原虫耐药性监测方面有广泛应用。 关键词： 荧光定量PCR；疟疾；SsUrRNA 中图分类号：飚31．3文献标识码：A文章编号：1006—3110(2014)01—0127—03 rRNA基因 疟疾是一种严重危害人类健康和生命的疾病，被 玉滨等№o根据四种感染人的疟原虫的18S wHO列为当前危害最为严重的三大传染病之一。我 序列，设计属、种特异性引物和TaqMan探针，用荧光 国疟疾病人以间日疟和恶性疟居多。近年来随着国际 定量PCR技术检测标本的基因拷贝数，并用电泳区 交往的增加，我国输入性疟疾急剧增加，疟疾的检测成 别各种疟原虫，阳性标本有特征性扩增曲线，且Ct值 为当前国境卫生检疫工作的重要内容。wHO将发展 与基因含量的对数logC0呈良好的线性关系，对产物 快速且准确诊断疟疾的技术视为防治疟疾优先考虑的 进行琼脂糖凝胶电泳可检测到特定长度片段，可以此 对策之一。准确有效的诊断方法对疟疾的控制具有重 鉴别虫种。 要意义。目前国内诊断疟疾仍以镜检为主，这需要操 1．1 探针法 荧光探针法是利用探针与靶序列特 作者具有丰富的镜检经验，在原虫密度低时容易出现 异杂交来指示扩增产物的增加，特异性高。师永霞 漏诊-l J，发生疟原虫混合感染时鉴别虫种较难。近年 等o”根据疟原虫SSUrRNA基因序列的高度保守性， rRNA 来国内外应用荧光定量PCR技术进行疟疾的快速检 比较恶性疟、间日疟、三日疟和卵形疟的SSU 测和分型-2，3j。荧光定量PCR是指在普通PCR的基基因序列，设计了疟疾通用型荧光定量PCR检测的引 础上加入荧光探针或荧光染料，通过对反应过程中荧 物和探针，TaqMan探针法，建立了疟疾的通用型荧光 光信号的检测实现对扩增过程中产物量的监测，可较 为精确地计算出PCR的初始模板量。荧光定量PCR显示该方法较巢式PCR更为敏感，更为省时，检测时 具有简便快速，敏感度高，特异性高等一系列优点。 间约需20min。虽然探针法在大规模筛选方面比常 规PCR方法更简便，但试剂价格昂贵，而且对样本处 1 荧光定量PCR在疟疾的诊断与虫种鉴别中的应用 理有特殊要求，使其在疟疾流行国家大规模筛选的现 分子方法在低密度疟原虫感染水平的检测更为敏 场应用存在很大的困难。 感，并且可以确定疟原虫种。考虑到要进行大规模地 1．2 染料法 荧光染料法是利用它的一些理化特 现场检测，必须综合考虑方法的易用性及成本。荧光 征指示扩增产物的增加，是相对简单的