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抗体的应用及选择 章进军 技术支持 QQ：248673767 抗体 (Ab):是B 细胞受抗原刺激后，分化为浆细胞合成并分泌的一类能与相应抗原特异结合的球蛋白。 抗体的应用 医疗领域： 诊断： 已知抗体查未知抗原；血型、乙肝、SARS、肿瘤相关抗原等 已知抗原查未知抗体；HIV、伤寒、自身免疫病等 预防： 应急预防（破伤风，Rh不合的新生儿溶血等） 治疗： 感染、抗移植排斥、抗炎、抗肿瘤 科研： western blot ELISA FACS IHC IP … Western blot Primary antibody 选择？ Secondary antibody 酶标二抗： 辣根过氧化酶（HRP) 碱性磷酸酶（AP) 葡萄糖氧化酶（GOT) 种属性:兔(与一抗来源相同） 来源：山羊（不能与抗原来源相同） ELISA 与western blot 不同点 二抗：必须能与抗原结合 但是不能与一抗（包被抗体）结合 抗原：小鼠 一抗：兔来源 二抗：不能是兔来源的 免疫组化 传统方法 即用型快捷免疫组化? 聚合物: 辣根过氧化物酶标羊抗鼠、兔（一抗） 碱性磷酸酶酶标抗鼠、兔（一抗） 免疫组织化学的应用 1.确定细胞类型 2.确定细胞类型 3.确定细胞类型 4.确定细胞类型 5.确定肿瘤分期 6.寻找感染病因 ….. FACS 目前流式仪可以检测的类别 荧光标记法 荧光抗体的介绍 用各种方法将单克隆抗体和流式仪能够检测到的荧光蛋白结合在一起就是流式操作中所用的荧光抗体 流式实验流程介绍 根据目前可见的三种激发光分 蓝色激发光405nm 绿色激发光488nm 红色激发光635nm 细胞结构 细胞大小 细胞粒度 细胞表面面积 核浆比例 DNA含量与细胞周期 RNA含量 蛋白质含量 染色体分析 细胞功能 细胞表面/胞浆/核的特异性抗原 细胞活性 细胞内细胞因子 酶活性 激素结合位点 细胞受体 细胞凋亡 流式细胞仪的临床应用 流式细胞仪的科研应用 免疫功能研究 癌症病人的多药耐药性 细胞动力学功能研究 动物性别筛选 海洋与环境微生物分析 染色体分选 Dynabeads （chip isolation activation) 抗体的选择 一抗： （1）确定抗体的名字，注意中英文名字、它名、亚型等信息 （2）确定你的实验类型，ELISA，WB，IHC，ICC，还是FACS。 （3）确定实验样本的种属，Human，Mouse，还是Rat 二抗 （1）种属来源 （2）标记物的选择 保存注意事项 收到抗体后12000rpm离心3min后再打开管盖进行分装和保存！ 大部分抗体是保存在-20度。 酶联抗体：保存在4度 荧光抗体：避光保存4度 抗体说明书 * 凯基生物是专业从事生物试剂研发、生产、销售和技术服务的国有公司 凯基生物现具有四条产品线：生命科学通用工具库、医学研究工具库、药物发现和开发工具库、核质与核信号研究工具库，五千余种产品，上万种品种规格供客户选择 液流系统：将细胞单个压入流动室 激光发射器 发出所需要的波长的激光 前向散射光检测器 光学滤镜 侧向散射光检测器 细菌 浮游生物 红细胞 淋巴细胞 中性粒细胞 单核细胞 DM：1um ——15um 直接染色法： 省时，一步染色 特异性强 可以同时进行多种颜色的染色 间接染色法： 荧光强度往往比较强 荧光颜色可以随时更换 耗时 非特异性染色干扰实验结果，特别是阳性率低的时候。 Biotin染色： 特异性较强的荧光识别 灵活选择颜色 只能使用一种带生物素的抗体 在全血中会有非特异性染色 1，将荧光抗体和细胞一起培养 2，抗体结合到细胞表面所对应的特殊抗原上 3，过流式细胞仪的时候，在激发光的照射下，抗体的荧光部分发出荧光 4，抗体发出的发射光被流式仪所收集 在上述信号基础上的细胞分选 流式细胞术的细胞学应用 HIV免疫分型，CD4绝对计数 白血病和淋巴瘤的免疫分型 肿瘤的细胞周期和倍体分析 网织红细胞计数 细胞移植的交叉配型和免疫状态监测 干细胞计数 残量白血病细胞检查 HLA-B27检查 血小板功能及相关疾病 Annexin V-FITC/PI双染色法 B淋巴细胞检测 淋巴细胞 B淋巴细胞 *