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一种基于检验朊病毒病中 PrPsc 复制模式的实验设计1 袁辉纯 南华大学医学院，湖南衡阳（421001 ） E-mail ：yuanhuichun2007@126.com 摘 要：本文所述及的实验设计的主要原理是:通过对蛋白质的一级结构进行同位素标记， 获得一级结构被精确标记的示踪蛋白质,从而可以对示踪蛋白质在细胞内的修饰和加工的变 化进行精确的检测和识别。选择特定的氨基酸进行同位素标记，获得该种氨基酸全部被标记 的蛋白质，可实现蛋白质一级结构的精确标记；通过对待测蛋白质及其特定氨基酸进行精确 的定量分析，可区分对感染动物补给的标记性的示踪蛋白质和感染动物自身合成的蛋白质。 分析实验获得的相关数据，可以确定蛋白质的来源，从而为检测 PrPsc 复制模式提供了科学 的依据。该实验在理论上能够较准确地检验朊病毒病发生过程中PrPc-PrPsc 复制模式存在与 否，从而为朊病毒病的致病因子和致病机制的研究提供可靠的依据。 关键词：朊病毒病，PrPc ，PrPsc ，复制模式 ，同位素标记，定量分析 1．引言 可传播性海绵状脑病(TSE)是一类侵袭人类及多种动物中枢神经系统的退行性脑病。关 于其感染因子的研究，人们提出了诸多假说，目前最为盛行的是朊病毒学说。该学说认为： 感染因子是一种不含核酸，具有自我复制能力的感染性蛋白粒子－朊病毒（Prion ），亦称 ［］ sc sc 1 PrP ，PrP 是TSE 致病的主要组成部分，甚至唯一感染因素 。在实验室中，人们发现 宿主细胞的一条染色体上含有一个基因,它编码的蛋白质与朊病毒类似,这种蛋白质的产生是 c c sc 正常的,且多数存在于神经元中,这种蛋白质也称PrP , PrP 与PrP 在多肽链的一级结构上是 相同的, 由于两种蛋白质的折叠方式不同,导致生物学作用的明显差异。在Prion 感染过程中， c sc sc 正常的蛋白质PrP 和异常的蛋白质PrP 分子间的相互作用被认为是产生新的PrP 的关键步 sc c sc sc 骤，并由此提出了 PrP 复制模式。复制模式的基础是由PrP -PrP 途径生成新的 PrP ，其 对TSE 的致病过程的描述为：PrPc 固定在磷脂酰肌醇多聚糖细胞膜上；感染因子PrPsc 与PrPc c c sc c sc 相结合，导致PrP 释放，PrP 转化为PrP ；细胞又合成新的PrP ,开始下一个循环；PrP 被 ［］ 神经细胞摄入和聚集导致海绵化 1 。朊病毒学说虽然是很有说服力的理论，但是目前还没 有精确的试验能够证明这种复制模式存在于感染动物体内。也没有证据说这种复制模式就是 朊病毒病的主要致病机制。而且，在其他很多中枢神经退行性脑病中，如 Alzhemer 症， Parkinson 病，雷诺小体病等，也有蛋白质异常聚集这一现象，其病理过程和临床表现上与 朊病毒病非常相似。为什么不认为这些疾病的蛋白质也有复制能力呢？如果仅凭蛋白质具有 传染性就断定蛋白质可以复制能力，这是缺乏科学依据的。由于朊病毒不仅能够简单地利用