霉菌酵母菌的检验方法.docVIP

霉菌、酵母菌的检验方法：1.设备和材料1.1温箱：25-281.2天平1.3显微镜1.4三角瓶：250ml1.5试管：15mm×150mm1.6平皿：直径9cm1.7吸管：1ml、10ml、25ml1.8酒精灯1.9载物玻片1.10盖玻片1.11广口瓶1.12牛皮纸袋:121灭菌15min1.13金属勺、刀等1.14试管架1.15接种针1.16橡皮乳头2.培养基和试剂2.1孟加拉红培养基：GB4789.28中4.81规定。2.2灭菌蒸馏水：将蒸馏水分装于250ml三角瓶中或9ml试管中，121高压灭菌15min，备用。2.3??75%乙醇3.检验程序取25g或25ml，加入225ml无菌水中? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ? 做成几个适当倍数的稀释样选择3个适宜稀释度，各以1ml加入灭菌平皿中2 每皿加入适量孟加拉红培养基5-28??5天4操作步骤4.1采样：取样时特别注意样品的代表性和避免采样时的污染。首先准备好灭菌容器和采样工具，如灭菌牛皮纸袋、广口瓶、金属刀或勺等。在卫生学调查基础上，采取有代表性的样品。样品采集后应尽快检验，否则应将样品放在低温干燥处。4.2以无菌操作称取检样25g（或25ml），放入含有225ml灭菌水的三角瓶中，振摇30min，即为1：10稀释液。4.3用灭菌吸管吸取1：10稀释液10ml,注入 试管中，另用带橡皮乳头的1ml灭菌吸管反复吹吸50次，使霉菌孢子充分散开。4.4按上述操作顺序做10倍递增稀释液，每稀释一次，换用一支1ml灭菌吸管，根据对样品污染情况的估计，选择2个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿，然后将凉至45左右的培养基注入平皿中，待琼脂凝固后，倒置于25-28温箱中，3天后开始观察。共培养观察5天。4.6计数方法：通常选择菌落数在10-150之间的平皿进行计数，同稀释度的2个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数，即为每克（或每毫升）检样中所含霉菌和酵母数。稀释度选择及菌落报告方式可参考菌落总数的检验方法中菌落计数。4.7报告：每克（或每毫升）食品所含霉菌和酵母数以cfu/g（或cfu/ml）表示。? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ? 制订依据：GB/T4789.15——2003五、? ? ? ? 乳酸菌总数的检验方法：乳酸菌：指一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳酸，需氧和兼性厌氧、多数无动力，过氧化氢酶阴性，革兰氏阳性的无芽孢杆菌和球菌。乳酸菌菌落总数：指检样在一定条件下培养后，所得1ml检样中所含乳酸菌菌落的总数。1、设备和材料温箱：36±1冰箱：0-4恒温水浴：46±1℃电炉：可调式吸管：容量为1、10和25ml广口瓶或三角瓶：容量为250 ml、500ml平皿：直径为9cm试管：15×150mm显微镜2、培养基和试剂2.1改良TJA培养基（改良番茄汁琼脂培养基）2.2改良MC培养基2.3革兰氏染色液2.4 3%过氧化氢溶液2.5 生理盐水：8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，分装于250ml三角瓶或9ml试管中，高压灭菌121、15分钟。3、乳酸菌菌落总数的测定3.1检验程序乳酸菌菌落总数检验程序如下:检? ?样做成几个适当稀释倍数选择2—3个适当稀释度各以1ml的量加入灭菌平皿内每皿内加入适量改良TJA或改良MC培养基36±1? ?3天菌落计数报 告3.2操作步骤3.2.1以无菌操作将经过充分摇匀的检验25 ml (或25g)放入装有225ml灭菌生理盐水的三角瓶内作成1:10均匀稀释液3.2.2用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml,沿管壁徐徐注入含有灭菌生理盐水的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)3.2.3另取1ml灭菌吸管,按上述操作顺序,作10倍递增稀释液，如此每递增一次，即换用1支1ml灭菌吸管。3.2.4选择2-3个以上适宜稀释度,分别在作10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。3.2.5稀释液移入平皿后,应及时将冷至50的乳酸菌计数培养基(改良TJA或改良MC)注入平皿约15ml,并转动平皿使混合均匀。同时将乳酸菌计数培养基倾入加有1ml稀释液检样用的灭菌生理盐水的灭菌平皿内作空白对照,以上整个操作自培养物加入培养皿开始至接种结束须在20min内完成。3.2.6待琼脂凝固后,翻转平板,置36±1温箱内培养72±3h取出,观察乳酸菌菌落特征(见表1)选取菌落数在30-300之间的平板进行计数,计算后,随机挑取5个菌落数进行革兰氏染色,显微境检查并做过氧化氢