梨自花及异花授粉对其花柱自发荧光的影响.pdf

维普资讯 园 艺 学 报 2003，30 (4)：439～442 AetaHordcultumeSlmca 梨 自花及异花授粉对其花柱 自发荧光的影响 徐国华 张绍铃 张超英2 陈迪新 (南京农业大学园艺学院，南京 210095； 南京师范大学生命科学学院，南京 210097) 摘 要：利用激光共聚焦显微技术研究 了砂梨 (PyrusserotinaRehd．)品种 丰‘水 ’自花授粉和异花 ( 二‘十世纪’)授粉 16h后花柱 自发荧光的分布规律。发现未授粉花柱整体的自发荧光 比较弱。但从柱头 端向子房端花柱 自发荧光呈上升趋势 ；异花授粉和自花授粉后花柱整体的 自发荧光都有所增加 ；授粉后 自 发荧光变化最大的部位在柱头区域；自花授粉后 ，在柱头及距柱头 0～400a／n范围内荧光值较高，其他区 域的荧光值相近；而异花授粉后在花柱的中部 (距柱头 1500～2050a／n范围内)荧光值最低；自花授粉后 自发荧光除柱头以外主要分布在花柱的边缘区域 ；异花授粉后 自发荧光在花柱上半部的分布情况与 自花授 粉类似，下半部分布相对均匀。 关键词：梨 ；自花授粉 ；异花授粉；花柱 ；自发荧光 ；激光共聚焦显微镜 中图分类号：S661．2 文献标识码 ：A 文章编号：0513—353X (2003)04-0439—04 1 目的、材料与方法 梨 ( )是典型的配子体型 自交不亲和性果树，目前虽然在梨 自交不亲和性基因的克隆…、 表达特性 J、产物的分离纯化及其功能的研究 ]等方面均取得了重大的进展 ，但是还不能完全解释 自 交不亲和性的机理 J。植物 自交不亲和性是雌蕊与花粉相互识别、相互作用结果的综合表现 ，涉及植 物细胞间信息传递、细胞识别及花粉管的定向生长等过程。已有研究主要集中在 自交不亲和性相关因 子对花粉萌发和花粉管伸长特性的影响方面 ]。而对于梨等木本果树在 自交不亲和性识别和反应过程 中花柱活体或半活体的生理变化研究极少。作者利用激光共聚焦显微镜对梨半活体花柱在 白花及异花 授粉后的自发荧光进行了比较研究，从另一个侧面来直观地反映 白花与异花授粉后花柱各个部位的生 理变化，为研究配子体型 自交不亲和性机理提供新的方法和手段。 以生产上主栽的已知 ．s基因型的砂梨 (尸 serotinaRehd．)品种 丰‘水’(基因型 ．s．s)和 二‘ 十世纪’(基因型 ．s2．s4)为试材。材料采 自江苏省高邮市果树试验场梨园6年生树，于2002年 3月 1 日每品种各剪取长60—8Ocm的2年生花枝 8条，每枝约有饱满花芽 1O 20个，带回室内插入盛有 5％蔗糖溶液的烧杯中 (溶液高度约5cm，每隔2d更换 1次糖溶液)，两个品种分放于两个光照培养 箱中，在光照 12h、光强60panol·mI2·s～、20~C恒温下培养 15d左右开始开花。先采取开花前 1 2 d的花蕾，取出花药，用透明纸包好后埋于硅胶 内，室温下干燥 1—2d即可散出花粉。选用花瓣即将 展开的大花蕾进行人工授粉后仍置于原培养箱中，不必套袋。设异花授粉： 丰‘水’(早)X 二‘十世 纪’ (舍)和 白花授粉 丰‘水’X 丰‘水’。授粉 16h后，选取基本等长的已授粉花柱，用镊子将其 从紧挨子房端取下，立即置于配备 Zeiss镜头的BioRADTMMRC1024ES激光共聚焦显微系统观察。将 花柱置于载物台上，依次从柱头开始向子房端分段观察 ，每段长度 550pan左右。仪器沿花柱段的纵 切面从一侧至另一侧每隔2pan自动扫描 1次，通过计算机采集图像数据。试验激发波长为488nln。 收稿 日期：2003—03—04；修 回日期：2003—06—10 基金项 目：国家 自然科学基金项 目 30270926)；国家高技术发展计划 (8“63”)项 目 (2002AA241191)；高等学校博士 点基金项 目 (20010307012)；江苏教育学院 “十五”科研重点资助项 目 *现工作单位：江苏教育学院生物系，南京210013 **通讯作者 ．E．mail：nnzsl@sina．coln．cn