煎煮法提取赤芍中芍药苷的研究.docVIP

煎煮法提取赤芍中芍药苷的研究 【摘要】 目的研究常规煎煮法提取赤芍中芍药苷的方法。方法采用正交实验设计，考察乙醇浓度、提取时间、提取次数、提取温度对煎煮法提取芍药苷的影响并进行优化。结果最佳煎煮法提取赤芍中芍药苷的工艺是80下40%乙醇提取3次，2 h/次，芍药苷提取率为35.4 mg/g。结论煎煮仍是常用的中药提取方法，该研究为赤芍煎煮法提取提供 参考 的优化方法和工艺条件。 【关键词】 煎煮法; 赤芍; 芍药苷; 正交实验 赤芍Radix Paeoniae Rubra为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflorapau或川赤芍的干燥根，在神农本草经和历代医籍 文献 中均有记载，其功效为清热凉血、祛瘀止痛。赤芍有免疫调节作用，临床常用于肿瘤和血瘀症的 治疗 ，尤以肝病常见[1]。国内外研究表明，其主要有效部位为赤芍总苷[1，2]，赤芍总苷中的主要成分为芍药苷，芍药苷具有扩张血管、镇痛镇静、抗炎抗溃疡、解热解痉、利尿、抗应激性溃疡病、扩张冠脉血管、对抗急性心肌缺血以及抑制血小板凝聚等多方面作用，而且毒性小，临床已用于治疗冠心病。 　　赤芍提取方法很多，包括超声波提取[3]、水煎煮[4]、微波提取[5]等，使用的提取溶剂包括水、乙醇、甲醇等[6]，然而常规的煎煮法仍然是目前药典和 工业 实际应用最常用的提取方法。本文采用L16(45)正交设计实验，综合考虑水和乙醇作为溶剂，以乙醇浓度(当浓度为0时即为水煎煮)、提取时间、提取次数和提取温度等工艺条件为考察因素，以芍药苷含量为考察指标，确定煎煮法提取赤芍中芍药苷的最佳工艺。 　　 1 仪器与试药 　　日本岛津液相：LC-10ATvp，SPD-M10Avp二级管阵列检测器(DAD)，SIL-10AD自动进样器，CLASS-VP色谱处理系统。 电子 天平，恒温水浴锅。赤芍(净制中药饮片，杭州中药饮片厂);芍药苷对照品(购于 中国 药品生物制品检定所);甲醇(色谱纯);乙醇(分析纯);桶装纯净水经Milipore过滤后使用。 　 　2 方法与结果 　　2.1 高效液相色谱分析 　　2.1.1 色谱条件色谱柱：Agilent C18 柱(150 mm×4.6 mm，5 μm);流动相：甲醇-0.5%醋酸(3070);流速：1.0 ml/min;检测波长：230 nm;进样量：20 μl。保留时间约在7.0 min。柱温：30。 　　2.1.2 对照品溶液的配制精密称取芍药苷标准样品12.7 mg，置50 ml量瓶中，加30%的甲醇定容至刻度，摇匀，即得对照品溶液(0.254 mg/ml)。 　　2.1.3 标准曲线的绘制分别精密称取芍药苷标准品0.6295 g，用30%甲醇定容至50 ml(12.59 mg/ml)，取该溶液依次进样1.0，3.0，6.0，9.0，12.0，15.0，18.0 μl，以色谱峰峰面积积分值对进样量回归，回归方程为Y=-6 613.6+349 027.2X，r=0.999 94，线性范围是12.59～151.08 μg。 　　2.2 芍药苷的提取按正交设计实施实验，每次称取赤芍饮片10 g，溶剂用量固定为10倍，提取完毕后，用10 ml的移液管量取提取液10.00 ml，稀释至100.0 ml，然后从稀释后的提取液中移取1ml于离心管中， 12 000 r/min的条件下离心10 min，取样进行高效液相分析芍药苷浓度，并 计算 芍药苷得率。其中芍药苷得率为单位质量赤芍药材提取出来的芍药苷质量，单位为 mg/g。 　　2.3 最佳工艺条件的研究采用L16(45)正交试验设计表，对乙醇浓度、提取时间、提取次数、提取温度4个因素进行考察，并进行方差分析。结果见表1～2。 　　由表1～2可得各因素对芍药苷提取率的影响大小次序为CBAD，最佳工艺条件为A2B4C3D4，即以40%乙醇为提取溶剂，100提取3次，2 h/次。由于80和100下的提取率非常相近，故从能源节约的角度出发，选择提取温度80。提取次数增加1次，不仅增加10倍溶剂倍量，并且40%乙醇回收过程也较为耗能，提取次数为3次和4次差别在10%以内。综合考虑，在实际生产中，为了节约能耗和成本，最佳工艺方案为以40%乙醇为提取溶剂，80提取3次，2 h/次。 　　按上述最佳工艺条件对芍药苷的提取工艺进行验证，结果芍药苷提取率为35.4 mg/g。表1 正交实验表2 方差分析 　　 3 结论 　　通过正交实验分析可知，影响因素顺序为提取次数提取时间乙醇浓度提取温度。综合考虑节能和提取成本，最佳煎煮法提取赤芍中芍药苷的工艺为以40%乙醇为提取溶剂，80提取3次，2 h/次。 【 参考 文献 】 　[1] 许惠玉. 赤芍总甙对荷瘤鼠细胞因子及诱导细胞凋亡影响因素的实验研究[D].