南极假丝酵母脂肪酶B的修饰及改造.pdf

基因组学与应用生物学，2011年，第 30卷，第 2期，第 243—250页 GenomicsandAppliedBiology，2011，Vo1．30，No．2，243—250 评述与展望 Review andProgress 南极假丝酵母脂肪酶 B的修饰与改造 章素平 柳志强 郑裕 国 浙江工业大学生物工程研究所，杭州I，310014 通讯作者，zhengyg@zjut．edu．cn 摘 要 南极假丝酵母脂肪酶 B是用途最为广泛的脂肪酶之一 ，可用于许多有机化合物、医药中间体等 的 合成。为了改善南极假丝酵母脂肪酶B的催化性能，提高其环境适应性 ，同时提高蛋 白的表达量，降低生产 成本，从而使其更适于工业化应用，许多针对酶蛋 白分子的修饰及改造方法 已在南极假丝酵母脂肪酶 B中 得到大量应用。本文从化学修饰、理性设计和非理性设计 3个方面详细综述了南极假丝酵母脂肪酶 B的修 饰与改造 的关键技术，包括定点突变、蛋 白质融合、易错 PCR和 DNA改组等 ，同时也介绍了以上技术在改 良南极假丝酵母脂肪酶 B特性方面的诸多成功实例。 关键词 南极假丝酵母脂肪酶 B，化学修饰，理性设计，非理性设计 ResearchProgressofM odificationforCandidaantarcticaLipaseB ZhangSuping LiuZhiqiang ZhengYuguo InstituteofBioengineering，Zh@angUniversityofTechnology，Hangzhou，310014 Correspondingauthor，zhenygg@zjut．educn DOI：1O．3969／gab．030．000243 Abstract CandidaantarcticalipaseB lSoneofthemostwidelyusedtipases．whichhasbeenusedforthesynthe- sisofmanyorganiccompounds．andpharmaceuticalintemr ediates．Inordertoimprovethecatalyticpropertiesof CandidaantarcticalipaseB，enhanceitsenvironmentaladaptabilityforindustrialapplications，increaseitsyield andreduceproductioncosts，manymodifiedmethodshavebeenwidelyapplied．Thispaperelaboratesonthetech— nologiesofrmodificationofCandida antarcticalipaseB from threeaspects：Chemicalmodification，rationalde— signandirrationaldesing ，suchassite—directedmutagenesis，proteinfusion，error-pronePCR，DNA shuffl ing，and thenpresentstheirapplicationandachievementsinimprovingthepropertiesofCandidaantarcticalipaseB． Keywords CandidaantracticalipaseB，Chemicalmodification，Rationaldesing ，Irrationaldesing 脂肪酶(1ipase，EC3．1．1．3)即三酰基甘油酰基水 脂肪酶比动、植物源脂肪酶的性质更具多样性f如更 解酶，是一种特殊的酯键水解酶 ，它可 以在油水界面 广的作用pH范围、作用温度范围以及作用底物多样 上催化油脂 的水解反应 ，生成脂肪酸和甘油、甘油单 性等)，更加适合于工业化生产。因此，微生物是工业 酯或二酯(Jaegereta1．，1994；Josepheta1．，2008)。脂肪 用脂肪酶 的重要来源 (Hasaneta1．，2006；Salameh 酶通常被用于在非水相体系中催化油脂及其它一些 andWiegel，2007)。其 中，南极假丝酵母脂肪酶 B 水不溶性酯类 的水解、醇解 、酯化、转酯化 以及酯类 (CandidaantarcticlipaseB，CALB)应用最为广泛，它 逆 向合成等反应 (Rufinoaeta1．，2010；Rejassecta1．， 对水溶性和非水溶性物质都表现 出较高 的催化活 2