高山被孢霉ω-3脂肪酸脱饱和酶基因在麦胚无细胞蛋白质合成系统中的表达.pdfVIP

生物技术进展 2016年 第6卷 第5期 346351 CurrentBiotechnology ISSN 2095—2341 高山被孢霉 3脂肪酸脱饱和酶基因在麦胚无细胞蛋 白质 合成系统中的表达 杨 芹， 陈海琴 ， 陈 思，顾震南， 张 灏， 陈永泉， 陈 卫p 江南大学食品学院，江苏 无锡 214122 摘 要：无细胞蛋 白质合成系统具有快速、方便等特点，能表达对活细胞具有一定毒性的膜蛋白和抗菌肽，近年来被广 r 泛应用。以来 自产油丝状真菌高山被孢霉多不饱和脂肪酸合成途径中的关键膜结合酶—— 3脂肪酸脱饱和酶为研究 对象，构建了适宜体外表达 ∞一3脂肪酸脱饱和酶的表达载体plVEXWG1．4一FADS15，并利用麦胚无细胞蛋 白质合成系统 f 实现 了对该基 因的高效表达。同时，通过在麦胚无细胞蛋白质合成过程中添加脂质体的方法，将所表达的膜蛋白正确定 位至脂质体磷脂双分子层，以便 目标蛋 白质的正确折叠。研究结果显示，在此实验条件下 目标蛋 白质的表达量达 P 1．8ms／mL，经碘海醇密度梯度超速离心纯化后，该蛋白质的纯度可以达到90％以上。研究结果为后续对该酶进行催化 特性研究和蛋白质晶体结构解析奠定了基础。 关键词：高山被孢霉；(I-3脂肪酸脱饱和酶；麦胚无细胞蛋白质合成系统；脂质体；蛋 白纯化 e DoI：10．3969／j．issn．2095-2341．2O16．05．07 l o Expression of the ^‘--3 Fatty Acid Desaturase from Mortierella alpina in W heat·germ Cell-freeProteinExpressionSystem i YANGQin，CHENHai—qin’，CHENSi，GUZhen—nan，ZHANGHao，CHENYong-quan，CHENWei SchoolofFoodScienceandTechnology，JiangnanUniversity，Jmn~uWuxi214122，China g Abstract：Cell-freeprotein expression system asatoolofrapidand convenientprotein expression hasbeenwidelyused in producingmembraneproteinsna dantibacterialpeptidesthathavecertmn toxicitytolivingcells．Inthispaper，themembrnae- bound I)‘一3fattyaciddesaturasegene．whichencodingthekeyenzymeinvolvinginthepolyunsaturatedfattyacidbiosynthesis pathwaysintheoleaginousfunsiMortierellaalpina，wasclonedintotheinvitro expressionvectorpIVEXWGI．4，andexpressed s inthewheat-germ cell-freeproteinexpressionsystem．Togetthecorrectlyfolded∞一3fattyaciddesaturaseFADSI5．1iposomes thatWaftabletorelocatetheexpressedmembrna eproteinintothephospholipidbilayerwerealsoaddedintheprocessofcell-f