融合蛋白GGH粉针剂制备工艺研究.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１６，３６（１１）：４８５３ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 檪 技术与方法 檪 殏 檪 殏檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪 融合蛋白ＧＧＨ粉针剂制备工艺研究 钱建瑛　许正宏　窦文芳 （江南大学药学院　无锡　２１４１２２） 摘要　目的：建立高效液相色谱法测定融合蛋白ＧＧＨ原料和注射用粉针剂含量的方法，筛选制 备粉针剂的辅料和ｐＨ，进行６个月的长期稳定性试验。方法：高效液相色谱采用ＷａｔｅｒｓＤＥＬＴＡ ＰＡＫＣ１８色谱柱，流动相为乙腈和水，梯度洗脱２０ｍｉｎ，检测波长２８０ｎｍ。根据粉针剂的外形、复 溶性、稳定性和活性保留率筛选填充剂及ｐＨ。结果：ＧＧＨ在０．２～１．６ｍｇ／ｍｌ范围内线性关系良 好，可用此方法进行制剂的含量检测；选用４％的甘露醇作为填充剂并调节ｐＨ为５．５，可以制备 性质较为稳定的ＧＧＨ冻干粉针剂。结论：可采用含量和纯度检测结合外观性状观察法用于粉针 剂的制备工艺筛选，为申报新药提供参考。 关键词　融合蛋白　粉针剂　含量测定　制备工艺 中图分类号　Ｑ８１９ 　　ＧＧＨ是江南大学药学院制药工程实验室自行研制 突变体的串联体（ＧＬＰ１Ａ２Ｇ）２的合理构象，利用重叠 开发的创新药物，是胰高血糖素样多肽１（ＧＬＰ１）突变 ＰＣＲ技术，在体外成功拼接获得了（ＧＬＰ１Ａ２Ｇ）２和 串联体与人血清白蛋白的表达质粒 ｐＰＩＣ９Ｋ／（ＧＬＰ ＨＳＡ的融合基因（ＧＧＨ），构建重组表达质粒 ｐＰＩＣ９Ｋ １Ａ２Ｇ）２ＨＳＡ在毕赤酵母ＫＭ７１中表达的融合蛋白，用 ＧＧＨ，并将其通过电转化法转入毕赤酵母表达系统，诱 ［９］ 于治疗糖尿病。 导表达了ＧＬＰ１突变体和ＨＳＡ的杂合分子 。因其属 　　ＧＬＰ１是由肠道Ｌ细胞合成和分泌的由３０个氨基 多肽类生物药物，口服会使生物活性破坏，只能通过皮 ［１２］ 下注射或静脉给药，结合该药物的特性，预将其制备成 酸组成的多肽 ，体内外研究显示 ＧＬＰ１具有增强葡 萄糖依赖性的胰岛素分泌、减少食物的摄取、减慢胃的 冻干粉针剂。本研究采用 ＨＰＬＣ方法检测 ＧＧＨ的纯 排空及抑制胰高血糖素的分泌、刺激胰 β细胞增殖、促 度，结合活性检测指标并将冻干粉针剂的成型性、溶解 进胰岛再生及抑制胰 细胞的凋亡等功能，且无胰岛 性等作为辅料筛选的依据，筛选了制备粉针剂的辅料 β ［３７］ 和ｐＨ，进行了６个月的长期稳定性试验，取得了对同类 素和磺脲类降糖药物的低血糖危险 。ＧＬＰ１独特的 降血糖作用机制，是现有抗糖尿病药物无可比拟的。 研究有借鉴价值的实验结果。 但在体内其极易被二肽酰基肽酶 （ＤＰＰ ）降解，限 Ⅳ Ⅳ １　材料与方法 ［８］ 制了ＧＬＰ１药物化的进展 。 　　为提高 ＧＬＰ１的长效性，江南大学药学院制药工 １．１　药品与试剂 程实验室利用 ＰＣＲ法克隆获得 ＧＬＰ１及其突变体 　　重组胰高血糖素样多肽１融合蛋白ＧＧＨ（江南大 ＧＬＰ１Ａ２Ｇ的基因，用生物信息学软件 ＩｎｓｉｇｈｔＩＩ、ＩＣＭ 学药学院制药工程实验室提供）；ｃＡＭＰ检测试剂盒 ｐｒｏ、Ａｍｂｅｒ计算得出ＧＬＰ１的突变体 ＧＬＰ１Ａ２Ｇ与其