多重RT-PCR检测蝴蝶兰3种病毒CymMV、ORSV和CMV.pdfVIP

江苏农业科学　２０１７年第４５卷第５期 — ９１— 涂小云，董小艳，郭春梅，等．多重ＲＴ－ＰＣＲ检测蝴蝶兰３种病毒ＣｙｍＭＶ、ＯＲＳＶ和ＣＭＶ［Ｊ］．江苏农业科学，２０１７，４５（５）：９１－９３． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１７．０５．０２４ 多重 ＲＴ－ＰＣＲ检测蝴蝶兰３种病毒 ＣｙｍＭＶ、ＯＲＳＶ和ＣＭＶ １ ２ １ １ ３ 涂小云 ，董小艳 ，郭春梅 ，何俊平 ，鲍恩亚 （１．江苏省连云港振兴花卉有限公司，江苏连云港２２２００２；２．江苏省连云港振兴农业发展集团有限公司，江苏连云港２２２００２； ３．江苏省连云港市房发园林绿化工程有限公司，江苏连云港２２２００２） 　　摘要：根据建兰花叶病毒（Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ，ＣｙｍＭＶ）、齿兰轮斑病毒（Ｏｄｏｎｔｏｇｌｏｓｓｕｍｒｉｎｇｓｐｏｔｖｉｒｕｓ，ＯＲＳＶ）和 黄瓜花叶病毒（ｃｕｃｕｍｂｅｒｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ，ＣＭＶ）３种病毒外壳蛋白基因序列保守序列设计特异性引物，以病毒侵染的蝴蝶 兰总ＲＮＡ反转录的ｃＤＮＡ为模板进行扩增，建立了三重ＲＴ－ＰＣＲ同时检测该３种病毒的方法。ＣｙｍＭＶ、ＯＲＳＶ和 ＣＭＶ３种病毒特异扩增的片段分别为５６１、４３３、３０６ｂｐ。用该方法对１７个疑似病毒感染的蝴蝶兰样品进行检测，结果 １３个材料检测出ＣｙｍＭＶ特异带，２个材料检测出ＯＲＳＶ病毒特异带，１个材料检测出ＣＭＶ病毒特异带，１个材料同时 检测出ＣｙｍＭＶ和ＯＲＳＶ病毒２条特异带，所检测的１７个蝴蝶兰材料未发现３种病毒复合侵染的情况。 　　关键词：蝴蝶兰；多重ＲＴ－ＰＣＲ；建兰花叶病毒；齿兰轮斑病毒；黄瓜花叶病毒；检测方法 ＋ 　　中图分类号：Ｓ４３６．８１　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１７）０５－００９１－０２ 　　兰花是一种高价值的观赏花卉，但一旦感染病毒，其观赏 一个ＰＣＲ反应体系进行扩增的方法，建立了二温式多重 ［８］ 价值和经济价值将受到严重影响。近年来，随着兰花国内外 ＲＴ－ＰＣＲ同时检测 ＣｙｍＭＶ和ＯＲＳＶ２种病毒的方法 ；章 贸易和种质交流频率的增加，兰花病毒病的发生有蔓延趋势。 鹏程等利用１对简并引物，通过一步式ＩＣ－ＲＴ－ＰＣＲ可以同 ［１０］ 目前，至少有２８种病毒可感染兰科植物，其中我国兰科植物 时检测ＣｙｍＭＶ和ＯＲＳＶ复合感染情况 。凤仙花坏死斑病 感染的病毒以建兰花叶病毒（Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ，Ｃｙｍ 毒（ｉｍｐａｔｉｅｎｓｎｅｃｒｏｔｉｃｓｐｏｔｖｉｒｕｓ，ＩＮＳＶ）和ＣｙｍＭＶ２种病毒也 ［１１］ ＭＶ）、齿兰轮斑病毒（Ｏｄｏｎｔｏｇｌｏｓｓｕｍｒｉｎｇｓｐｏｔｖｉｒｕｓ，ＯＲＳＶ）为 可以通过双重ＲＴ－ＰＣＲ同时检测 。樊荣辉等通过优化三 主，且这２种病毒复合感染占多数，也有少数蝴蝶兰感染黄瓜 重ＰＣＲ反应条件，一次扩增能同时检测文心兰 ＣｙｍＭＶ、 ［１］ 花叶病毒（ｃｕｃｕｍｂｅｒｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ，ＣＭＶ） 。ＣｙｍＭＶ和ＯＲＳＶ ＯＲＳＶ和菜豆黄花叶病毒（ｂｅａｎｙｅｌｌｏｗｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ，ＢＹＭＶ）的