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花卉组织培养中污染的发生与防范治疗 　　摘要：花卉组织培养是指将成熟的花卉植株中具有全能分化繁殖能力的组织取出，在培养基或者培养槽中进行离体培养，将其培养成完整的花卉幼株。花卉培养的基本流程包括取材、消毒、环境配置、接种等步骤。导致花卉组织污染主要的污染源是有害的细菌以及真菌，感染原因主要有空气污染、接种设备污染、人员污染、消毒设备污染等。为了防范这些因素污染花卉，最直接的措施是培养过程的控制，其方法通常采用抗生素、分组织培养、高盐度培养、污染幼株移除等方法。另外，不同的母株预处理以及外植体的选择也对污染情况有较大影响 关键词：花卉组织培养；污染；因素；防范治疗 植物组织培养始于20世纪初，是以植物生理学为基础发展起来的技术，即应用无菌操作方法，培养植物的离体器官、组织或细胞。进入工业时代，花木产业也开始工业化发展，为了获得大量保持优秀基因的花卉幼苗，利用花卉组织在培养基中进行培养已成为花卉产业的首选。但花卉组织培养过程中，发生组织污染概率极大，轻则导致培养成的幼株生长缓慢，重则导致花卉幼株死亡 1 花卉组织培养技术概述 1.1 花卉组织培养 花卉组织培养是指将花卉的一部分接种在培养基上，将其培养发育成为新的花卉植株。时至今日，以植物的胚、子房、根茎、叶片等离体组织进行愈伤培养，已经成为获得大量与母本同基因幼株的方法 1.2 花卉组织培养的基本步骤 1.2.1 取材。取材是花卉组织培养的第一步。理论上讲，花卉的每个具有完整细胞核的植物细胞都有分化繁殖的可能。不同的花卉品种，选用的外植体的部位也不同。可以用顶芽、腋芽、叶、叶柄、茎段、茎尖、花梗、花蕾、花瓣、球茎、鳞茎球茎、根茎类等等，所以，对于不同种类的花卉，其取材也不同 1.2.2 消毒。消毒主要针对接种环境以及外植体，要对接种室内空气进行消毒，一般采用次氯酸盐类消毒剂。然后对外植体进行消毒，常用的消毒剂有次氯酸钠、酒精、氧化汞等。将外植体在这些消毒液中浸泡一定时间，然后用无菌水冲洗干净，最后进行接种 1.2.3 环境布置。花卉组织培养对培养环境有较为严格的要求，包括光照、温湿度、空气、培养基体等。光照强度要根据花卉的光饱和点设置，温湿度要根据不同花卉光暗期的最适应温差进行设置，同时控制培养器皿内的相对湿度。花卉组织培养过程中，CO2浓度有较大影响，光合作用会消耗培养瓶中的CO2，因此，一般采用透气的封膜 1.2.4 接种。在取材、消毒、环境布置都准备就绪后，进行培养组织的接种。接种采用经过消毒的接种设备，接种后多个组织一般在一个培养容器中培养至其分化出根、叶等器官后，逐渐进行分株培养 2 花卉组织培养过程中导致污染的因素 2.1 花卉组织培养污染发生 花卉组织培养过程中，有一些细菌与真菌感染花卉后，导致其无法生长或者由于菌类产生的毒素而凋零，这就是最常见的花卉污染病。根据污染菌类的不同，分为细菌污染与真菌污染。真菌污染由于其孢子繁殖速度快，因此，一旦污染会在培养基中较快形成真菌菌落。而细菌污染会在花卉组织中潜伏较长一段时间，前期不容易发现。菌类污染还根据其来源分为外部污染与内生污染，外部污染的菌类从外部的空气、器具、人员处传染；内生污染是由于外植体本身带有内生菌，没有消毒完全而导致的污染 2.2 导致花卉组织污染的具体原因 2.2.1 空气污染。一般发生在使用时间较久的接种室中，由于人员进出带动污染空气进入接种室，进而污染外植体或者离体培养组织。空气污染一般是真菌孢子污染传播的主要方式。培养瓶在接种前虽然一般是密封的，但也有可能在接种人员的反复操作中，被带有污染菌类的空气进入其中，从而对培养组织造成污染 2.2.2 设备污染。主要是消毒设备不完善以及培养设备的污染导致。消毒设备如果本身带有污染源，而消毒液的消毒效果又因为质量问题导致消毒效果不佳的情况下，可能导致外植体成批污染。培养设备的污染也有2种可能的原因：一是培养设备消毒不善，本身带有污染菌落；二是外植体带有内生污染源，进入培养瓶后污染了整个培养瓶 2.2.3 人员污染。培养操作人员出入接种室，原则上要进行严格的消毒并穿戴无菌的工作服装与手套。人员带来的污染：一类是接种人员没有进行妥善的消毒，或者没有按照规定穿戴消过毒的工作服装用品；一类是工作服与手套消毒不善，带有污染菌 3 对花卉组织培养污染的防范治疗措施 3.1 母株预处理 在从母株取材之前，可以对母株进行连续多日的消毒预处理。一般每2～3天对母株喷洒1次消毒液，消毒液的浓度不宜过高，经过半个月到1个月的消毒后，基本可以有效控制母株的内生污染 3.2 抗生素防治 使用抗生素是对付球菌、葡萄球菌、杆状菌等细菌的特效消毒手段。在使用抗生素前，检验与分析污染组织，